兔熱休克蛋白20(HSP-20)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu)
貨號：D2300
規格：50T/ 00T
保存：室溫(5℃-25℃) 幹燥保存，複檢期 2 個(ge) 月，2℃-8℃保存時間更長。
試劑盒內(nei) 容： 50T 00T
RNase A ml ml×2
蛋白酶 K ml ml×2
玻璃珠 6g g
溶液 A 0ml 20ml
溶液 B 0ml 20ml
漂洗液 5ml 5ml×2
洗脫液 0ml 20ml
吸附柱 50 個(ge)  00 個(ge)
收集管 50 個(ge)  00 個(ge)
說明書(shu)   份  份
兔熱休克蛋白20(HSP-20)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu) ：
真菌是具有真核和細胞壁的異養(yang) 生物。種屬很多，已報道的屬達 萬(wan) 以上，種超過 0 萬(wan) 個(ge) 。真菌通常又分為(wei) 三類，即酵母菌、黴菌和蕈菌（大型真菌）。對於(yu) 酵母菌和黴菌，可以用玻璃珠處理，而對於(yu) 大型真菌，可直接用液氮研磨。經過前期處理的菌液，用矽質膜吸附，即可得到高純度的基因組。提取純化後的 DNA，可以直接用於(yu) PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下遊應用實驗。
兔熱休克蛋白20(HSP-20)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu) 操作步驟：
使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體(ti) 積請參照瓶體(ti) 上的標簽。所有離心步驟均為(wei) 使用台式離心機在室溫下離心。
、樣品的處理：
）對於(yu) 酵母菌，取 -2ml 培養(yang) 好的菌液，離心收集，棄上清。加入 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 00mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5-0min。
2）黴菌(孢子也可相同處理)：取 50-00mg 菌絲(si) ，加 200ul 溶液 A，用玻璃研磨器適當研磨分散菌絲(si) ，加入 20ul RNase A，再加入 00mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 30min。
3）大型真菌（如蘑菇等）：稱取 50-00mg 樣品，倒入適量的液氮，立即研磨重複 3 次，使樣品研成粉末（如無液氮，可加 200ul 溶液 A 後用玻璃研磨器適當研磨），加 200ul 溶液 A，加入 20ul RNase A，再加入 00mg 玻璃珠，在高速振蕩器上振蕩，約 5min。
2、加入 20ul 0mg/ml 的蛋白酶 K，充分混勻，55℃水浴消化，30min。消化期間可顛倒離心管混勻數次，2000rpm離心 2min。將上清轉移到一個(ge) 新的離心管中。如有沉澱，可再次離心。
3、在上清中加入 200ul 溶液 B，充分混勻。如出現白色沉澱，可放 55℃水浴 5min，沉澱即會(hui) 消失，不影響後續實驗。如溶液未變清亮，說明樣品消化不*，可能導致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導致上柱後堵柱子，請增加消化時間。
4、再加入 200ul 無水乙醇，充分混勻，此時可能會(hui) 出現絮狀沉澱，不影響 DNA 的提取，將溶液和絮狀沉澱都加入吸附柱中，放置 2 分鍾。
5、2000rpm 離心 min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，2000rpm 離心 min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，2000rpm 離心 min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。
8、2000rpm 離心 2min，將吸附柱置於(yu) 室溫或 50℃溫箱放置數分鍾，目的是將吸附柱中殘餘(yu) 的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(hui) 影響後續的實驗如酶切、PCR 等。9、將吸附柱放入一個(ge) 幹淨的離心管中，向吸附膜懸空滴加 50-200ul 經 65℃水浴預熱的洗脫液，室溫放置5min，2000rpm 離心 min。
0、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置 2min，2000rpm 離心 2min，即可得到高質量的基因組 DNA。
兔熱休克蛋白20(HSP-20)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu) 注意事項：
.由於(yu) 真菌種類萬(wan) 千，對於(yu) 一些特別難處理的真菌，可用液氮研磨，再用玻璃珠振蕩，蛋白酶K處理，一般都可以得到一定量的基因組DNA，如電泳檢測很弱，一般PCR都會(hui) 有較好結果。
2.若溶液A或溶液B中有沉澱，可在 55℃水浴中重新溶解。
3.如果DNA提取量很少，可加長玻璃珠處理時間，如果提取DNA成彌散短條帶，可減少玻璃珠處理時間。
4.洗脫緩衝(chong) 液的體(ti) 積不少於(yu) 50ul，體(ti) 積過小會(hui) 影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在 8.0 左右(可用NaOH將水的pH值調至此範圍)，pH值低於(yu) 7.0 會(hui) 降低洗脫效率；DNA產(chan) 物應保存在-20℃，以防DNA降解。
5.DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA片段的大小與(yu) 樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guan) 。回收得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與(yu) 純度。DNA應在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為(wei) 相當於(yu) 大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為(wei) .7-.9，如果洗脫時不使用洗脫緩衝(chong) 液，而使用去離子水，比值會(hui) 偏低，因為(wei) pH值和離子存在會(hui) 影響光吸收值，但並不表示純度低。
6.在確保樣品無誤的情況下，如經過多次試驗，都無法提出DNA，請將部分樣品寄至我公司，我們(men) 代為(wei) 摸索優(you) 化條件，以使您的實驗能夠正常進行下去。
兔熱休克蛋白20(HSP-20)酶聯免疫（Elisa）試劑盒說明書(shu) 相關(guan) 產(chan) 品：
E020 EB 染色液
D00 6×DNA Loading Buffer
T060 50×TAE 緩衝(chong) 液
T050 5×TBE 緩衝(chong) 液
M060 D2000 DNA Ladder
M400 kb DNA Ladder
G842 GoldView II 型核酸染色劑(5000×)