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本試劑盒僅(jin) 供研究使用。
使用目的:本試劑盒定性測定猴血液、或其它相關(guan) 組織中B病毒的表達
實驗原理:
本試劑盒采用雙抗體(ti) 夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中猴B病毒。用純化的B病毒抗體(ti) 包被微孔板,製成固相抗體(ti) ,可與(yu) 樣品中B病毒相結合,經洗滌除去未結合的抗體(ti) 和其他成分後再與(yu) HRP標記的B病毒抗體(ti) 結合,形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物,經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度(OD值),與(yu) CUTOFF值相比較,從(cong) 而判定標本中猴B病毒的存在與(yu) 否。
標本要求:
.標本處理:血清、血漿標本可直接檢測
2.標本按要求製備後盡早進行實驗。如不能及時檢測,可將標本在-20℃保存一個(ge) 月,但應避免反複凍融。
3.猴B病毒不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑製辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘(yu) 各步操作相同)
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照(標準品)50μl。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品0μl。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml後備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體(ti) ,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鍾
0.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後5分鍾以內(nei) 進行。
注意事項
.操作嚴(yan) 格按照說明書(shu) 進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
4.封板膜隻限一次性使用,以避免交叉汙染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準,使用雙波長檢測時,參考波長為(wei) 630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。終止液為(wei) 2M的硫酸,使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
.猴B病毒試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個(ge) 月
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