原理
本實驗采用雙抗體(ti) 夾心 ABC-ELISA法。用抗人 Collagen II 單抗包被於(yu) 酶標板上，標準品和樣品中的 Collagen II與(yu) 單抗結合，加入化的抗人Collagen II，形成免疫複合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與(yu) 結合，加入底物工作液顯藍色，zui後加終止液硫酸，在450nm處測OD值，Collagen II濃度與(yu) OD值成正比，可通過繪製標準曲線求出標本中Collagen II濃度。

準備試劑與(yu) 收集血樣

. 收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yang) 上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反複凍融。

2. 標準品液配製：設標準管7管，每管加入標本稀釋液300ul。在*管中加入000ng/ml的標準品溶液300ul混勻後用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反複作對倍稀釋，從(cong) 第六管中吸出300ul棄去。第七管為(wei) 空白對照。加上原液管總共八管。

3. 0×標本稀釋液用蒸餾水作:0倍稀釋（示例：ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4. 洗滌液：用重蒸水:20稀釋（示例：ml濃縮洗滌液加入9ml的重蒸水）

檢測程序

. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品00ul，將反應板充分混勻後置37℃20分鍾。

2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印幹。

3. 每孔中加入*抗體(ti) 工作液00ul。將反應板充分混勻後置37℃60分鍾。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶標抗體(ti) 工作液00ul。將反應板置37℃30分鍾。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液00ul，置37 ℃暗處反應5分鍾。

8. 每孔加入00ul終止液混勻。

9. 30分鍾內(nei) 用酶標儀(yi) 在450nm處測吸光值。

結果計算與(yu) 判斷

. 所有OD值都應減除空白值後再行計算。

2. 以標準品000、500、250、25、62.5、3.2、5.6、0 ng/ml為(wei) 橫坐標，OD值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。

3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應Collagen II含量。

試劑盒性能

. 靈敏度：zui小的Collagen II 檢測濃度小於(yu) 8ng/ml。

2. 特異性：可同時檢測重組或天然的人Collagen II。不與(yu) 人其它細胞因子有交叉反應。

3. 重複性：板內(nei) 、板見變異係數均小於(yu) 0％。

注意事項

. 以上標準孔及待測樣品均建議做複孔，每次測定應同時做標準曲線。

2. 洗滌過程很關(guan) 鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。

3. 板條開封後剩餘(yu) 板條要再封好，保持板條幹燥。

4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

5. 本試劑盒僅(jin) 用於(yu) 科研，不能用於(yu) 臨(lin) 床診斷！