本試劑僅(jin) 供研究使用      標本：血清或血漿

試驗原理：

試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知GDF-5濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nei) 進行檢測。先將GDF-5和標記的抗體(ti) 同時溫育。洗滌後，加入親(qin) 和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然後加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chan) 生顏色。顏色的深淺和樣品中GDF-5的濃度呈比例關(guan) 係。

試劑盒內(nei) 容及其配製

自備材料

1. 蒸餾水。
2. 加樣器：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水衝洗。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒裏的任何成份。

操作注意事項

1. 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢複到室溫。稀稀過後的標準品應丟棄，不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉汙染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用幹淨的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒裏的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍幹，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露於光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成後應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清－－－－-操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液後，000×g離心0分鍾將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿－－－－-EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用於檢測。000×g離心30分鍾去除顆粒。
3. 細胞上清液－－-000×g離心0分鍾去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿－－－－-將組織加入適量生理鹽水搗碎。000×g離心0分鍾，取上清液
5. 保存－－－－－－如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反複冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1. 標準品：標準品的係列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

1. 洗滌緩衝液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做複孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用複孔的盡量做複孔。標本用標本稀釋液：稀釋後加入50ul於反應孔內。
3. 加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔、加入待測樣品50ul於反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育小時。
4. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鍾。
6. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育0分鍾。避免光照。
8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液後應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。