實驗原理：
瘦素酶免實驗是一種基於(yu) 夾心法原理的固相酶免吸附實驗（ELISA）。反應板上的微檢測孔包被有能結合瘦素分子上*抗原位點的單克隆抗體(ti) 。一份含有內(nei) 源性瘦素的病人樣本在包被孔中與(yu) 特異性兔抗瘦素抗體(ti) 進行孵育，之後就會(hui) 形成一個(ge) 夾心複合物。孵育後，用洗滌液洗去未結合的物質，再加入過氧化物酶標記的抗兔抗體(ti) 以檢測結合在包被板上的瘦素的量。加入底物溶液後，顯出的顏色強度與(yu) 病人樣品中瘦素的濃度成正比。
試劑盒成分：
）包被板，2×8孔，可拆，微孔中包被了抗瘦素抗體(ti) （單克隆）
2）標準品（0-5），6支 凍幹型0.5mL，濃度：0,2,5,25,50,00ng/ml，內(nei) 含0.3%的Proclin防腐劑
3）質控品， 2支，200ul，即用，2個(ge) 濃度（低與(yu) 高），具體(ti) 數值與(yu) 範圍請見試劑瓶標簽或QC質控單。內(nei) 含0.3%的Proclin防腐劑。
4）實驗緩衝(chong) 液，支，ml，即用，內(nei) 含0.3%的Proclin防腐劑
5）抗血清，支，ml，即用，單克隆瘦素抗血清，內(nei) 含0.3%的Proclin防腐劑。
6）酶複合物，支，ml ，即用，辣根過氧酶標記的抗兔複合物，內(nei) 含0.3%的Proclin防腐劑
7）TMB底物液，支，4ml，即用
8）終止液，支，4ml，即用，內(nei) 含0.5M的H2SO4，避免接觸終止液，以免刺激皮膚或灼燒皮膚。
9）洗滌液（40×），支 30ml
注：零標準品應視需要而定。
實驗步驟：
所有的標準品、質控品和樣品都必須做雙份檢測以確保所有的檢測條件都一樣。每一次實驗都有一條標準曲線。
）將所需數目的板條置於(yu) 板架上。。
2）用一次性吸嘴將標準品﹑質控品和樣品分別5μL加入相應的檢測孔中。
3）每孔加入00μL的檢測緩衝(chong) 液。
4）充分混合0秒，在此步驟中充分混合非常重要。
5）室溫下溫育20分鍾。
6）快速棄去檢測孔中的內(nei) 含物，每孔用300μL洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍幹以除去殘餘(yu) 液體(ti) 。注意：洗板步驟是否正確操作會(hui) 明顯影響實驗的靈敏度和度。
7）每孔加入00μL抗血清。
8）在室溫下溫育30分鍾。
9）快速棄去檢測孔中的內(nei) 含物，每孔用300μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍幹以除去殘餘(yu) 液體(ti) 。
0）每孔加入00μL酶聯物。
）在室溫下溫育30分鍾。
2）快速棄去檢測孔中的內(nei) 含物，每孔用300μL的洗滌液洗板三次，在吸水紙上拍幹以除去殘餘(yu) 液體(ti) 。
3）每孔加入00μL底物液。
4）室溫溫育5分鍾。
5）每孔加入50μL終止液以終止酶反應。
6）在加終止液後0分鍾內(nei) 於(yu) 450±0nm處讀取OD值。
結果計算
）計算每個(ge) 標準品、質控品和病人樣本的平均吸光度值。
2）用吸光度值作為(wei) 縱坐標（y），濃度值作為(wei) 橫坐標（x），以每個(ge) 標準品的吸光度值對其相應的濃度值進行標繪，作一標準曲線。
3）用每一樣品的平均吸光度值在標準曲線上確定其相應的濃度。
4）自動計算方法：在IFU上，它用四參數曲線已自動計算出結果。其它的歸納方法可能會(hui) 得出稍微不同的結果。
5）樣品的濃度可直接從(cong) 標準曲線上讀取。樣品中HPL濃度高於(yu) zui高標準品的必須用進行進一步的稀釋。在計算樣品濃度時就應當把此稀釋因子考慮進去。