使用目的:
本試劑盒用於(yu) 測定大鼠血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中促卵泡激素(FSH)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中大鼠促卵泡激素(FSH)水平。用純化的大鼠促卵泡激素(FSH)抗體(ti) 包被微孔板,製成固相抗體(ti) ,往包被單抗的微孔中依次加入促卵泡激素(FSH),再與(yu) HRP標記的促卵泡激素(FSH)抗體(ti) 結合,形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物,經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促卵泡激素(FSH)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠促卵泡激素(FSH)濃度。
試劑盒組成
30倍濃縮洗滌液 20ml×瓶 7 終止液 6ml×瓶
2 酶標試劑 6ml×瓶 8 標準品(48 IU/L) 0.5ml×瓶
3 酶標包被板 2孔×8條 9 標準品稀釋液 .5ml×瓶
4 樣品稀釋液 6ml×瓶 0 說明書(shu) 份
5 顯色劑A液 6ml×瓶 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×/瓶 2 密封袋 個(ge)
標本要求
.標本采集後盡早進行提取,提取按相關(guan) 文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於(yu) -20℃保存,但應避免反複凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑製辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
24 IU/L 5號標準品 50μl的原倍標準品加入50μl標準品稀釋液
2 IU/L 4號標準品 50μl的5號標準品加入50μl標準品稀釋液
6 IU/L 3號標準品 50μl的4號標準品加入50μl標準品稀釋液
3 IU/L 2號標準品 50μl的3號標準品加入50μl標準品稀釋液
.5 IU/L 號標準品 50μl的2號標準品加入50μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘(yu) 各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為(wei) 5倍)。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體(ti) ,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鍾.
0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後5分鍾以內(nei) 進行。
電話
微信掃一掃