17-OHP  馬17羥孕酮酶聯免疫試劑盒說明書(shu)

實驗原理：

試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中17-OHP 表達。用純化的17-OHP 抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，可與(yu) 樣品中17-OHP 相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分後再與(yu) HRP 標記的17-OHP 抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) 抗原 酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀(yi) 在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與(yu) CUTOFF 值相比較，從(cong) 而判定標本中17-OHP 的存在與(yu) 否。

樣本要求：

1．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) 20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作程序：

操作步驟：

1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50%l。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40%l，然後再加待測樣品 10%l。加樣將樣品加 於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此重複 5 次，拍幹。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50%l，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50%l，再加入顯色劑 B50%l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鍾.

10. 終止：每孔加終止液 50%l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液後 15 分鍾以內(nei) 進行。

注意事項：

1． 操作嚴(yan) 格按照說明書(shu) 進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 1530 分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準，使用雙波長檢測時，參考波長為(wei) 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。終止液為(wei) 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期：

1． 試劑盒保存：；28℃。

2．有效期：6 個(ge) 月