人基質金屬蛋白酶抑製因子4(TIMP-4)elisa試劑盒說明書(shu)

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用於(yu) 多種病原微生物所引起的傳(chuan) 染病、寄生蟲病及非傳(chuan) 染病等方麵的免疫診斷。也已應用於(yu) 大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為(wei) ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易於(yu) 自動化操作等特點。不僅(jin) 適用於(yu) 臨(lin) 床標本的檢查，而且由於(yu) 一天之內(nei) 可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合於(yu) 血清流行病學調查。本法不僅(jin) 可以用來測定抗體(ti) ，而且也可用於(yu) 測定體(ti) 液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用範圍日益擴大，可概括四個(ge) 方麵：

1、免疫酶染色各種細胞內(nei) 成份的定位。

2、研究抗酶抗體(ti) 的合成。

3、顯現微量的免疫沉澱反應。

4、定量檢測體(ti) 液中抗原或抗體(ti) 成份。

 組成 :

試劑盒組成      48孔配置            96孔配置            保存

說明書(shu)              1份                1份  

封板膜          2片（48）          2片（96）   

密封袋             1個(ge)                 1個(ge)   

酶標包被板        1×48             1×96            2-8℃保存

標準品          0.3ml×6瓶         0.3ml×6瓶         2-8℃保存

標準品稀釋液    3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

檢測抗體(ti) -HRP    5ml×1瓶           10ml×1瓶          2-8℃保存

顯色劑A液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

顯色劑B液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

終止液          3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存

20*洗滌緩衝(chong) 液   25ml×1瓶          15ml×1瓶          2-8℃保存

需自備的設備及試劑：

1.450±10nm濾光片酶標儀(yi) （建議儀(yi) 器使用前預熱）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.

3.Eppendorf 移液器.

4.蒸餾水或去離子水.

5.脫脂棉吸水紙.

6.37℃恒溫箱.

7.100ml和1000ml量筒.

8.準備若幹個(ge) 標準品稀釋管.

注意事項

1.試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫，使用後請立即按照說明書(shu) 要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉汙染。

2．加樣：加樣時，要控製加樣速度，避免*孔與(yu) zui後一孔之見的時間間隔過大，否則將會(hui) 導致不同的預孵育時間，從(cong) 而影響實驗的準確性以及重複性；一般加樣時間控製在10分鍾內(nei) ，如果樣本數量過多，可使用多道移液器。

3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nei) 進行孵育，嚴(yan) 格按照說明書(shu) 上規定的孵育時間和溫度進行。

4.洗滌：洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍幹，同時要消除板底殘留的液體(ti) 和手指痕跡，避免影響zui後的酶標儀(yi) 讀數。

5.反應時間的控製：加入底物後請定時觀察反應孔的顏色變化(比如，10分鍾左右)，如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。

6.建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。

7.建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線，試用幾個(ge) 標本)，如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產(chan) 品本身以外的任何損失。

操作步驟

1. 取出試劑盒，於(yu) 室溫(20-25℃)放置15-30分鍾。實驗過程應在室溫(20-25℃)內(nei) 進行。

2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液於(yu) 空白微孔中。

3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；

4. 在樣品孔中加入10μl的生物su；(不含空白對照孔,切忌：生物su隻加樣品孔！)

5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液；(不含空白對照孔)

6. 將酶標板用封口膠密封後，37℃孵育反應 1小時；(在孵育箱中保持穩定的溫度與(yu) 濕度)

7. 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與(yu) 蒸餾水稀釋)

8. 酶標板洗滌後用吸水紙*拍幹；

9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)

10. 20-25℃下避光反應15分鍾；

11.各孔加入50μl終止液，終止反應；

結果判斷

1. 30分鍾內(nei) 在波長450nm的酶標儀(yi) 上讀取各孔的OD值；

2. 以OD值為(wei) 縱坐標，以標準品的濃度為(wei) 橫坐標，繪製曲線圖；

3. 根據樣品的OD值查找對應的濃度範圍；