人心肌成纖維細胞培養(yang) 試劑盒說明書(shu)

檢測原理
本試劑盒采用雙抗體(ti) 兩(liang) 步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被抗BB抗體(ti) （BBAb）透明酶標包被板中，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為(wei) 藍色產(chan) 物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與(yu) 樣品中抗BB抗（BBAb）濃度呈正相關(guan) ，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中抗BB抗體(ti) （BBAb）含量。
操作步驟
、準備：從(cong) 冰箱取出試劑盒，室溫複溫平衡30分鍾。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定於(yu) 框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本0μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體(ti) ，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板4次（也可用洗板機按說明書(shu) 操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重複4的操作。
8、洗板：重複5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色5min。
0、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
、測定：以空白孔調零，在終止後5分鍾內(nei) ，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
2、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為(wei) 實際測定濃度乘以稀釋倍數。
樣本要求
、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為(wei) 疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑製劑。
2、標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放於(yu) 20℃保存，但應避免反複凍融。
3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。
人心肌成纖維細胞培養(yang) 試劑盒注意事項
、實驗嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準。
2、酶標包被板開封後如未用完，應立即裝入密封袋中加幹燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量範圍為(wei) 0.200ng/ml，超過此範圍，為(wei) 標準曲線延伸計算所得，不做為(wei) 準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋後測定準確結果（0.200ng/ml範圍內(nei) ），乘以總稀釋倍數即為(wei) 樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
7、為(wei) 避免交叉汙染，標準品、樣本和空白對照每加一個(ge) 就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重複使用封板膜。
8、試劑盒保質期內(nei) 使用，不同批號的試劑不得混用。 
9、底物B對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。