人鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)抗體(ti) (IgG)hth体育下载地址說明書(shu)
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2、抗體(ti) ----高效、靈敏、特異
3、規範包被操作----吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
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6、技術服務要求:專(zhuan) 業(ye) ,規範,高效
7、適用於(yu) 血漿、血清、組織勻漿液、細胞培養(yang) 上清液、尿液等多種類型的樣本
樣本處理及要求:
. 血清:室溫血液自然凝固0-20分鍾,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉澱,應再次離心。
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑,混合0-20分鍾後,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yang) 上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到
00萬(wan) /ml左右。通過反複凍融,以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。
5. 組織標本:切割標本後,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測,其餘(yu) 冷凍備用。
6. 標本采集後盡早進行提取,提取按相關(guan) 文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於(yu) -20℃保存,但應避免反複凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑製辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
. 標準品的稀釋與(yu) 加樣:在酶標包被板上設標準品孔0孔,在di一、第二孔中分別加標準品00μl,然後在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然後從(cong) di一孔、第二孔中各取00μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻後從(cong) 第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從(cong) 第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻後從(cong) 第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋後各孔加樣量都為(wei) 50μl,濃度分別為(wei) 80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘(yu) 各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品0μl(樣品最終稀釋度為(wei) 5倍)。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體(ti) ,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鍾.
0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液後5分鍾。
注意事項
. 試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30 分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好控製在5 分鍾內(nei) ,如標本數量多,使用排槍加樣。
4. 封板膜隻限一次性使用,以避免交叉汙染。
5. 底物請避光保存。
6. 嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
7. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
8. 本試劑不同批號組分不得混用。
9.如需代測或者樣本暫時不測定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間避免反複凍融,-20℃以下可保存三個(ge) 月,-70℃以下可保存六個(ge) 月。
0.試劑使用須知:
.()請參照相關(guan) 法規、文獻、MSDS等信息,理解並掌握好試劑的特性,再進行安全操作。
2.(2)通常購買(mai) 試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩餘(yu) 的話,更加注意其他保管和管理。
3.(3)萬(wan) 一試劑操作者並非專(zhuan) 業(ye) 技術人員。必須在專(zhuan) 業(ye) 人士的指導監督下進行操作。對於(yu) 使用後的廢棄物,不要或者舊的試劑,應按照相關(guan) 法律法規正當處理。
4.(4)購買(mai) 後,請務必確認標簽上的注意事項;做好預防顛倒,摔壞的措施和管理體(ti) 製;在使用前再次確認標簽上的注意事項,做好必要的安全對策;對沒有標明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進行操作;必須帶好防護用具,小心翼翼進行操作。
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