植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）elisa試劑盒說明書(shu)

本試劑盒僅(jin) 供研究使用

實驗原理
是采用雙抗體(ti) 一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）捕獲抗體(ti) 的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體(ti) ，經過溫育並*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物吲哚乙酸氧化酶(IAAO）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

樣本處理要求
.血清：室溫血液自然凝固0-20分鍾，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。 

2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑，混合0-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。

3.尿液：用無菌管收集，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.細胞培養(yang) 上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到00萬(wan) /ml左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

5.組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。
組成注意事項

. 嚴(yan) 格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用後立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸幹孔內(nei) 液體(ti) 。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除板底殘留的液體(ti) 和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉汙染以免造成錯誤結果。

6. 在儲(chu) 存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體(ti) 。任何漂白成分都會(hui) 破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chan) 品。

0. 實驗還需要酶標儀(yi) （450nm），37℃恒溫箱，高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL以及蒸餾水或去離子水。

. 試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡後方可使用。

2. 20×洗滌緩衝(chong) 液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份20×洗滌緩衝(chong) 液加9份蒸餾水。

3. 如果可能傳(chuan) 播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

4.標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能人上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融.

5.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
產(chan) 品優(you) 勢

. 品種齊全、質量可靠、靈敏度高、特異性強、重複性好、操作簡便、穩定性好。

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