衣氏放線菌PCR進口試劑盒說明書(shu)

產(chan) 品名稱：
產(chan) 品規格：50T
原理是由一對引物介導，能在動植物體(ti) 外對特定基因(DNA)斷進行快速酶促擴增，經過n個(ge) 熱循環擴增，擴增產(chan) 物中所含特定基因數是原始模板數的(+E)n(0＜E＜,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chan) 物中的特定基因成為(wei) 可能。產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研實驗

特異性強

PCR反應的特異性決(jue) 定因素為(wei) ：

①引物與(yu) 模板DNA特異正確的結合；

②堿基配對原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

④靶基因的特異性與(yu) 保守性。

產(chan) 品特點：
本產(chan) 品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產(chan) 品。
具有下列特點：
.根據 指標的保守序列設計的專(zhuan) 一性引物，與(yu) 相關(guan) 病毒無交叉反應。
2.靈敏度比常規 PCR 高 2-3 個(ge) 數量級，可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開即用，用戶隻需要提供樣品模板，操作簡單，定量準確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測，避免後續汙染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體(ti) 係的熒光定量 PCR。
6.本產(chan) 品隻適用於(yu) 科研，不能用於(yu) 臨(lin) 床診斷。
規格及成分                            成分
 2×qPCR MagicMix                 500 μL（裝 A 袋）
微量核酸稀釋液（熒光 PCR ） mL（裝 A 袋）
PCR 引物混合物                        00 μL（裝 A 袋）
基因陽性對照                           50 μL（裝 B 袋）
DNA 病毒裂解液（試用裝）       5 次（9 mL）
使用手冊(ce)                               份
運輸及保存：低溫運輸、-20℃保存(A 袋試劑放樣品準備區、B 袋的陽性對照好分開放置)，
自備試劑DNA 模板、0×ROX（根據機型決(jue) 定，具體(ti) 見使用方法）。
應用案例
樣品 DNA 的製備
.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 5 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對照（以 0E2-0E7 這 6 個(ge) 0 倍稀釋度為(wei) 例。由於(yu) 標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬(wan) 不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分）。為(wei) 增加產(chan) 品穩定性和避免擴散傳(chuan) 染性病原，本產(chan) 品不提供活體(ti) 樣品做陽性對照，隻提供可以直接使用的長為(wei) 86bp 的 DNA 段作為(wei) 陽性對照。
2.標記 6 個(ge) 離心管，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（好用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL ×0E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 分鍾，得×0E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL ×0E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 分鍾，得 ×0E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL ×0E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 分鍾，得 ×0E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL ×0E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得×0E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重複上麵的操作直到得到 6 個(ge) 稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
設置 qPCR 反應（20  μL 體(ti) 係，在樣品製備室進行）
9.在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重複，下表隻列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢後才設置陽性對照，並且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chu) 存好後後加）：
注:僅(jin) ABI7500、7700 和 7900 儀(yi) 器需要使用 ROX 作為(wei) 對照，其他熒光 PCR 儀(yi) 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，則用水替代。
0. 蓋上蓋子後上機，按下麵參數進行 PCR（具體(ti) PCR 參數可以根據儀(yi) 器不同而自行
優(you) 化）。
過程溫度時間
預變性95℃ 分鍾
PCR 反應95℃5 秒
（30 個(ge) 循環）60℃5 秒
72℃5 秒
. 數據采集
具體(ti) 操作按所用儀(yi) 器的流程進行。本產(chan) 品中所含的熒光染料在不結合 DNA 時，
大吸收光譜在 47 nm，結合 DNA 時的吸收光譜在 500 nm，大發射光
譜在 530 nm。
四、數據處理
2. 以陽性對照濃度的 log 值為(wei) 橫軸，以 Ct 值為(wei) 縱軸，繪製標準曲線。再以待測樣品
的 Ct 值從(cong) 標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
組成及試劑配製:

、酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍幹品）： 2瓶，請臨(lin) 用前5分鍾內(nei) 配製。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好後室溫靜置大約0分鍾，同時反複顛倒/搓動以助溶解，其濃度為(wei) 200 U/L，然後做係列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配製成200 U/L，00 U/L，50 U/L，25 U/L，2.5 U/L，6.25 U/L，3.2 U/L，樣品稀釋液直接作為(wei) 空白孔 0 U/L。如配製00 U/L標準品：取0.3ml （不要少於(yu) 0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其餘(yu) 濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：×20ml。

4、 檢測稀釋液A：×0ml。

5、 檢測稀釋液B：×0ml。
注意事項：

．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環次數；

5．PCR 反應液的配製；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chan) 物；

9．PCR反應體(ti) 係與(yu) 反應條件。   

【儲(chu) 存條件及有效期】:

-20℃避光保存，避免反複凍融，有效期6個(ge) 月。

【適用儀(yi) 器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀(yi) 。

【樣本采集、存放及運輸】

u 樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；

u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可保存，但應避免反複凍融

u 運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。

【自備試劑】:產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研實驗