病豬藍耳高致病/NADC-30S雙重核酸檢測試劑盒說明書(shu)
產(chan) 品名稱: 
規格:  48T/盒
分類:核酸檢測試劑盒
原理是由一對引物介導，能在動植物體(ti) 外對特定基因(DNA)斷進行快速酶促擴增，經過n個(ge) 熱循環擴增，擴增產(chan) 物中所含特定基因數是原始模板數的(+E)n(0＜E＜,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chan) 物中的特定基因成為(wei) 可能。
特異性強
PCR反應的特異性決(jue) 定因素為(wei) ：
①引物與(yu) 模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
      ④靶基因的特異性與(yu) 保守性。
產(chan) 品及特點 ：
聚合酶鏈式反應（PCR）是體(ti) 外酶促合成特異DNA段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（複性）及適溫延伸等幾步反應組成一個(ge) 周期，循環進行，使目的DNA得以迅速擴增，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。本產(chan) 品就是為(wei) 滿足這一需求根據 PCR 原理開發的產(chan) 品，它具有下列特點：
. 一管式操作，用戶隻需要提供樣品即可。
2. 根據大豆熱休克蛋白基因保守區域設計引物，能專(zhuan) 一性檢測出樣品中的大豆成分，但不能檢測其他非大豆成分。
3. 快速，整個(ge) 檢測過程（按一個(ge) 樣品計）所需時間僅(jin) 為(wei) 2.0 小時。
4. 隻需要普通 PCR 儀(yi) 和凝膠電泳儀(yi) ，無需配置貴重儀(yi) 器設備。
5. 對混合樣品中大豆成分的檢測下限為(wei) 0.%，對樣品中大豆成分的核酸檢測下限為(wei) .0ng/μL。
6. 本隻能用於(yu) 科研，足夠 50 次 40uL 體(ti) 係的常規 PCR。
具有下列特點：
.根據 指標的保守序列設計的專(zhuan) 一性引物，與(yu) 相關(guan) 病毒無交叉反應。
2.靈敏度比常規 PCR 高 2-3 個(ge) 數量級，可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開即用，用戶隻需要提供樣品模板，操作簡單，定量準確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測，避免後續汙染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體(ti) 係的熒光定量 PCR。
6.本產(chan) 品隻適用於(yu) 科研，不能用於(yu) 臨(lin) 床診斷。
規格及成分                            成分
2×qPCR MagicMix                 500 μL（裝 A 袋）
微量核酸稀釋液（熒光 PCR ） mL（裝 A 袋）
PCR 引物混合物                        00 μL（裝 A 袋）
基因陽性對照                           50 μL（裝 B 袋）
DNA 病毒裂解液（試用裝）       5 次（9 mL）
使用手冊(ce)                               份
運輸及保存：低溫運輸、-20℃保存(A 袋試劑放樣品準備區、B 袋的陽性對照分開放置)，
自備試劑DNA 模板、0×ROX（根據機型決(jue) 定，具體(ti) 見使用方法）。
應用案例
樣品 DNA 的製備
.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 5 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽性對照（以 0E2-0E7 這 6 個(ge) 0 倍稀釋度為(wei) 例。由於(yu) 標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬(wan) 不能汙染樣品或本試劑盒的其他成分）。為(wei) 增加產(chan) 品穩定性和避免擴散傳(chuan) 染性病原，本產(chan) 品不提供活體(ti) 樣品做陽性對照，隻提供可以直接使用的長為(wei) 86bp 的 DNA 段作為(wei) 陽性對照。
2.標記 6 個(ge) 離心管，分別為(wei) 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL ×0E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 分鍾，得×0E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL ×0E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 分鍾，得 ×0E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL ×0E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 分鍾，得 ×0E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL ×0E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得×0E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重複上麵的操作直到得到 6 個(ge) 稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
設置 qPCR 反應（20  μL 體(ti) 係，在樣品製備室進行）
9.在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重複，下表隻列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢後才設置陽性對照，並且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chu) 存好後*後加）：
注:僅(jin) ABI7500、7700 和 7900 儀(yi) 器需要使用 ROX 作為(wei) 對照，其他熒光 PCR 儀(yi) 器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX，則用水替代。
0. 蓋上蓋子後上機，按下麵參數進行 PCR（具體(ti) PCR 參數可以根據儀(yi) 器不同而自行
優(you) 化）。
過程溫度時間
預變性95℃ 分鍾
PCR 反應95℃5 秒
（30 個(ge) 循環）60℃5 秒
72℃5 秒
. 數據采集
具體(ti) 操作按所用儀(yi) 器的流程進行。本產(chan) 品中所含的熒光染料在不結合 DNA 時，
吸收光譜在 47 nm，結合 DNA 時的吸收光譜在 500 nm，發射光
譜在 530 nm。
四、數據處理
2. 以陽性對照濃度的 log 值為(wei) 橫軸，以 Ct 值為(wei) 縱軸，繪製標準曲線。再以待測樣品
的 Ct 值從(cong) 標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。