胸膜肺炎放線杆菌PCR檢測試劑盒說明書(shu)

產(chan) 品名稱:胸膜肺炎放線杆菌PCR檢測試劑盒

英文名稱:Actinobacillus pleuropneumoniaePCR
技術特點：
在哪裏有賣準確可靠，臨(lin) 床雙盲對照試驗＞000例，結果與(yu) 金標準測序法比對，結果*性大於(yu) 99%。
2高靈敏：可檢測低至0ng的人基因組DNA。
3快速：整個(ge) 檢測流程隻需3小時。
4產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研簡便：試劑盒提供預混好的試劑，使體(ti) 係配置操作簡便。
5防汙染
6高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結果的特異性和準確性引物與(yu) DNA互補鏈結合必需*配對，才能延伸。探針特異性與(yu) 所檢測基因的PCR產(chan) 物配對，在延伸中產(chan) 生熒光。
產(chan) 品及特點：
. 即開即用，用戶隻需要提供放線杆菌樣品。
2. 根據伴放線放線杆菌保守序列設計的專(zhuan) 一性引物，與(yu) 相關(guan) 病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免後續汙染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體(ti) 係的熒光定量PCR。
組成及試劑配製:
、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍幹品）： 2瓶，請臨(lin) 用前5分鍾內(nei) 配製。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好後室溫靜置大約0分鍾，同時反複顛倒/搓動以助溶解，其濃度為(wei) 200 U/L，然後做係列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配製成200 U/L，00 U/L，50 U/L，25 U/L，2.5 U/L，6.25 U/L，3.2 U/L，樣品稀釋液直接作為(wei) 空白孔 0 U/L。如配製00 U/L標準品：取0.3ml （不要少於(yu) 0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其餘(yu) 濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：×20ml。
4、 檢測稀釋液A：×0ml。
5、 檢測稀釋液B：×0ml。

實驗注意事項：

）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；

2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；

3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。

4）樣本保存於(yu) 液氮或幹冰，也可以保存於(yu) Trizol液中。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體(ti) 係中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個(ge) PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩(liang) 類，探針類是利用與(yu) 靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chan) 物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

反應五要素：

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應的關(guan) 鍵，PCR 產(chan) 物的特異性取決(jue) 於(yu) 引物與(yu) 模板DNA互補的程度。理論上，隻要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體(ti) 外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 5-30bp，常用為(wei) 20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為(wei) 宜，特定條件下可擴增長至0kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為(wei) 宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個(ge) 以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nei) 部出現二級結構，避免兩(liang) 條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會(hui) 形成引物二聚體(ti) ，產(chan) 生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是zui末及倒數第二個(ge) 堿基，應嚴(yan) 格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與(yu) 核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.～umol或0～00pmol，以*引物量產(chan) 生所需要的結果為(wei) 好，引物濃度偏高會(hui) 引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體(ti) 的機會(hui) 。