說明書(shu)

實驗原理

試劑盒采用雙抗體(ti) 一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被猴外源性γ幹擾素（Exo-IFN-γ）捕獲抗體(ti) 的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體(ti) ，經過溫育並*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的猴外源性γ幹擾素（Exo-IFN-γ）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣本處理及要求

.  血清：全血標本請於(yu) 室溫放置2小時或4℃過夜後於(yu) 000g離心20分鍾，取上清即可檢測，或將標本放於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

2.  血漿：可用EDTA或肝素作為(wei) 抗凝劑，標本采集後30分鍾內(nei) 於(yu) 2 - 8°C 000g離心20分鍾，或將標本放於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.0M, pH=7.4)衝(chong) 洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會(hui) 影響測量結果），稱重後將碎。將剪碎的組織與(yu) 對應體(ti) 積的PBS（一般按:9的重量體(ti) 積比，比如g的組織樣品對應9mL的PBS，具體(ti) 體(ti) 積可根據實驗需要適當調整，並做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑製劑）加入玻璃勻漿器中，於(yu) 冰上充分研磨。為(wei) 了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反複凍融。*後將勻漿液於(yu) 5000×g離心5~0分鍾，取上清檢測。

4.  細胞培養(yang) 物上清或其它生物標本：000g離心20分鍾，取上清即可檢測，或將標本放於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

注：標本溶血會(hui) 影響*後檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

標本處理

.  本公司隻對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

2.  實驗前應預測標本含量，如果標本濃度過高，應對標本進行稀釋，使稀釋後的標本符合試劑盒的檢測範圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。標本使用0.0mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。

3.  若所檢樣本不包含在說明書(shu) 所列樣本之中，建議進行預實驗驗證其有效性，並注意留存樣本。

4.  使用化學裂解液製備的組織勻漿或細胞提取液可能會(hui) 由於(yu) 某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。

5.  若樣本為(wei) 細胞培養(yang) 上清，因該類樣本幹擾因素較多，如：細胞狀態、細胞數量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

6.  某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為(wei) 與(yu) 本產(chan) 品所使用的檢測抗體(ti) 及捕獲抗體(ti) 不匹配，而不被檢測出。

7.  建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會(hui) 存在蛋白降解或變性導致實驗結果偏差。

需要而未提供的試劑和器材

. 酶標儀(yi) （450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

名稱 96孔配置 48孔配置 備注

微孔酶標板 8孔×2條 8孔×6條 無

標準品 0.3mL*6管 0.3mL*6管 無

樣本稀釋液 6mL 3mL 無

檢測抗體(ti) -HRP 0mL 5mL 無

20×洗滌緩衝(chong) 液 25mL 5mL 按說明書(shu) 進行稀釋

底物A 6mL 3mL 無

底物B 6mL 3mL 無

終止液 6mL 3mL 無

封板膜 2張 2張 無

說明書(shu) 份 份 無

自封袋 個(ge) 個(ge) 無

備注：

.  標準品濃度依次為(wei) ：200、00、50、25、2.5、0 pg/mL

2.  經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測範圍內(nei) ，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋後再進行實驗。

注意事項

. 嚴(yan) 格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用後立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸幹孔內(nei) 液體(ti) 。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除板底殘留的液體(ti) 和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉汙染以免造成錯誤結果。

6. 在儲(chu) 存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體(ti) 。任何漂白成分都會(hui) 破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chan) 品。

0. 如果可能傳(chuan) 播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡後方可使用。

20×洗滌緩衝(chong) 液的稀釋：蒸餾水按：20稀釋，即份20×洗滌緩衝(chong) 液加9份蒸餾水。

操作步驟

.  從(cong) 室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘(yu) 板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體(ti) 00μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體(ti) ，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育5min。

7.  每孔加入終止液50μL，5min內(nei) ，在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為(wei) 橫坐標，標準品的濃度值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上或用相關(guan) 軟件繪製標準曲線，並得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

試劑盒性能

.  檢測範圍：6.25 pg/mL – 200 pg/mL。

2.  靈敏度：檢測濃度小於(yu) .0 pg/mL。

3.  特異性：不與(yu) 其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重複性：板內(nei) 變異係數小於(yu) 0% ，板間變異係數小於(yu) 5% 。

說明

.  由於(yu) 現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全麵的鑒定與(yu) 分析，本產(chan) 品可能存在一定的質量技術風險。

2.  *終的實驗結果與(yu) 試劑的有效性、實驗者的相關(guan) 操作以及當時的實驗環境密切相關(guan) ，請務必準備充足的標本備份。

3.  不同批次的同一產(chan) 品可能會(hui) 有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內(nei) 說明書(shu) 進行實驗操作，網站電子版說明書(shu) 僅(jin) 作參考。

4.  隻有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他製造商的產(chan) 品。隻有嚴(yan) 格遵守本試劑盒的實驗說明才會(hui) 得到*佳的檢測結果。

保存及有效期

l 本試劑盒用於(yu) 體(ti) 外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guan) 液體(ti) 樣本中猴外源性γ幹擾素（Exo-IFN-γ）的含量。

2有效期：6個(ge) 月

3保存條件：2-8℃

4本試劑盒僅(jin) 供體(ti) 外研究使用，不用於(yu) 臨(lin) 床診斷