使用說明書(shu)              

目    的：                                             

       本試劑盒用於(yu) 測定人血清，血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中人腦源性神經因子(BDNF)的含量。

檢測範圍：                                         

5.0ng/L -00ng/L

實驗原理：

       本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人腦源性神經因子(BDNF)水平。用純化的抗原包被微孔板，製成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入人腦源性神經因子(BDNF)，再與(yu)   HRP  標記的抗原結合，形成抗原-抗體(ti) -酶標抗原複合物，經過*洗滌後加底物  TMB  顯色。TMB  在 HRP酶的催化下轉化成藍色，   並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。   顏色的深淺和樣品中的人腦源性神經因子(BDNF)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在  450nm  波長下測定吸光度（OD  值）  ，通過標準曲線計算樣品中人腦源性神經因子(BDNF)濃度。

試劑盒組成：

Reagent

Quantity

酶標包被板

2well×8strips

標準品: 480pg/mL

×0.5ml

標準品稀釋液

×.5ml

酶標試劑

×6ml

樣品稀釋液

×6ml

顯色劑A液

×6ml

顯色劑B液

×6ml

終止液

×6ml

30倍濃縮洗滌液

×20ml×30flod

說明書(shu)

封板膜

2

密封袋

樣本處理及要求：

.  血清：室溫血液自然凝固  0-20  分鍾，離心  20  分鍾左右（2000-3000  轉/分）  。

仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。

2.  血漿：應根據標本的要求選擇  EDTA  或檸檬酸鈉作為(wei) 抗凝劑，混合  0-20  分鍾後，

離心 20  分鍾左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。

3.  尿液：用無菌管收集，離心  20  分鍾左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.  細胞培養(yang) 上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心  20  分鍾左右（2000-3000 

轉/分）  。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時，用  PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到  00  萬(wan) /ml  左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心  20  分鍾左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

5.  組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的  PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保

存備用。標本融化後仍然保持  2-8℃的溫度。加入一定量的  PBS（PH7.4）  ，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心  20  分鍾左右（2000-3000  轉/分）  。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。

6.  標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融.

7.  不能檢測含  NaN3  的樣品，因  NaN3  抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

 標準品：其濃度為(wei) ,00pg/mL(貯液)。先將其稀釋為(wei) 00pg/mL(標準曲線zui高濃度)後，再準備5個(ge) 稀釋標準品的EP 管，每個(ge) EP 管中加入50μL 的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成00pg/mL, 50pg/mL,25pg/mL, 2.5pg/mL, 6.25pg/mL, 3.2pg/mL,，標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為(wei) 空白孔。為(wei) 保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液
            

Tube

0

2

3

4

5

pg/mL

.00

50

25

   2.5

6.25

3.2

 2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）  、待

測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液  40μ l，然後再加待測樣品  0μ l（樣品zui終稀釋度為(wei)   5  倍）   。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板後置  37℃溫育  30  分鍾。

4.  配液：將  20  倍濃縮洗滌液用蒸餾水  20  倍稀釋後備用。

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置  30  秒後棄去，

如此重複  5  次，拍幹。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑  50μ l，空白孔除外。

7.  溫育：操作同  3。

8.  洗滌：操作同  5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑  A50μ l，再加入顯色劑  B50μ l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 5  分鍾.

0.  終止：每孔加終止液  50μ l，終止反應（此時藍色立轉黃色）  。

.  測定：以空白空調零，450nm  波長依序測量各孔的吸光度（OD  值）  。  測定應

在加終止液後  5  分鍾以內(nei) 進行。

注意事項：

． 試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡  5-30  分鍾後方可使用，酶標包被板開封後

如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控製在  5  分鍾內(nei) ，如標本數量多，使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本  OD 

值大於(yu) 標準品孔*孔的  OD  值）  ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n  倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）  。

5．  封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

6．  底物請避光保存。

7．  嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準. 

8．  所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。

9．  本試劑不同批號組分不得混用。

計算

以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD  值為(wei) 縱坐標，

在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的  OD

值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋

倍數；或用標準物的濃度與(yu)   OD  值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的  OD  值

代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋

倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。

試劑盒性能：

.樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數  R  值為(wei)   0.990  以上。

2.批內(nei) 與(yu) 批見應分別小於(yu)   9%和  %

3.保存條件及有效期：

a.試劑盒保存：2-8℃。

b.有效期：6  個(ge) 月