【檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體(ti) 兩(liang) 步夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被犬組織多肽抗原（TPA）多克隆抗體(ti) 透明酶標包被板中，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為(wei) 藍色產(chan) 物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與(yu) 樣品中犬組織多肽抗原（TPA）濃度呈正相關(guan) ，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中犬組織多肽抗原（TPA）含量。

【試劑盒組成】

酶標包被板

2孔×8條

7

顯色劑A液

6mL

2

標準品：60U/L

0.6mL

8

顯色劑B液

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

標準品稀釋液

6mL

0

說明書(shu)

份

5

樣本稀釋液

6mL

封板膜

2張

6

酶標試劑

6mL

2

密封袋

個(ge)

備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為(wei) ：60、80、40、20、0、5U/L

【需要而未提供的試劑和器材】

、37℃恒溫箱

2、標準規格酶標儀(yi)

3、精密移液器及一次性吸頭

4、蒸餾水

5、一次性試管

6、吸水紙

【操作步驟】

、準備：從(cong) 冰箱取出試劑盒，室溫複溫平衡30分鍾。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定於(yu) 框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本0μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板：棄去液體(ti) ，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板4次（也可用洗板機按說明書(shu) 操作洗板）。

6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。

7、溫育：重複4的操作。

8、洗板：重複5的操作。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色5min。

0、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。

、測定：以空白孔調零，在終止後5分鍾內(nei) ，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。

2、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為(wei) 實際測定濃度乘以稀釋倍數。

【樣本要求】

、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為(wei) 疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑製劑。

2、標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融。

3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。

【注意事項】

、實驗嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準。

2、酶標包被板開封後如未用完，應立即裝入密封袋中加幹燥劑保存。

3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。

4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

5、本試劑盒定量範圍為(wei) 5-60U/L，超過此範圍，為(wei) 標準曲線延伸計算所得，不做為(wei) 準確定量結果，請用標準品稀釋液稀釋後測定準確結果（5-60U/L範圍內(nei) ），乘以總稀釋倍數即為(wei) 樣本zui終濃度。

6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。

7、為(wei) 避免交叉汙染，標準品、樣本和空白對照每加一個(ge) 就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重複使用封板膜。

8、試劑盒保質期內(nei) 使用，不同批號的試劑不得混用。

9、底物B對光敏感，避免長時間暴露於(yu) 光下。

【操作程序總結】

準備試劑，樣品和標準品

加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鍾

洗板4次，加入酶標試劑，37℃反應30分鍾

洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色5分鍾

加入終止液

5分鍾之內(nei) 讀OD值

計算

【檢測範圍】

5-60U/L

【規格】

96人份/盒

【貯藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6個(ge) 月