檢測原理
試劑盒采用雙抗體(ti) 一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被異丙腎上腺素（iso-Hyd）抗體(ti) 的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體(ti) ，經過溫育並*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的異丙腎上腺素（iso-Hyd）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
. 血清：使用不含熱原和內(nei) 毒素的試管，操作過程中避免任何細胞
刺激，收集血液後，3000 轉離心0 分鍾將血清和紅細胞迅速小心地
分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鍾取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心0 分鍾去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心0 分鍾
取上清。
5. 保存：如果樣本收集後不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於(yu)
-20℃，避免反複凍融，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
. 酶標儀(yi) （450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項
. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鍾。從(cong) 冰箱取出的
濃縮洗滌液會(hui) 有結晶，這屬於(yu) 正常現象，水浴加熱使結晶*溶解
後再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫幹燥）保存。
3. 濃度為(wei) 0 的S0 號標準品即可視為(wei) 陰性對照或者空白；按照說明
書(shu) 操作時樣本已經稀釋5 倍，zui終結果乘以5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴(yan) 格按照說明書(shu) 中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體(ti) 組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標板2 孔×8 條2 孔×4 條無
標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
樣本稀釋液6mL 3mL 無
檢測抗體(ti) -HRP 0mL 5mL 無
20×洗滌緩衝(chong) 液25mL 5mL 按說明書(shu) 進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書(shu) 份 份無
自封袋 個(ge) 個(ge) 無
注：標準品（S0-S5）濃度依次為(wei) ：0、00、200、400、800、600μg/mL
試劑的準備
20×洗滌緩衝(chong) 液的稀釋：蒸餾水按：20 稀釋，即 份的20×洗滌緩
衝(chong) 液加9 份的蒸餾水。
洗板方法
. 手工洗板：甩盡孔內(nei) 液體(ti) ，每孔加滿洗滌液，靜置min 後甩盡
孔內(nei) 液體(ti) ，在吸水紙上拍幹，如此洗板5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡min，洗板5 次。
操作步驟
. 從(cong) 室溫平衡20min 後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘(yu) 板條用自封
袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本0μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不
加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
（HRP）標記的檢測抗體(ti) 00μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴
鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體(ti) ，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育5min。
7. 每孔加入終止液50μL，5min 內(nei) ，在450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結果判斷
繪製標準曲線：在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應
OD 值作縱坐標，繪製出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
. 準確性：標準品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數R 值，大於(yu) 等於(yu)
0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小於(yu) 0μg/mL。
3. 特異性：不與(yu) 其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重複性：板內(nei) 、板間變異係數均小於(yu) 5%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 個(ge) 月