實驗原理：
本 試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）水平。用純化的人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b），再與(yu) HRP標記的抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）抗體(ti) 結 合，形成抗體(ti) 抗原酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）濃度。
人抗酒石酸酸性磷酸酶elisa試劑盒操作步驟：
. 標準品的稀釋： 本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同） 、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然後再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5 倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複 5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
0 
0. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後5分鍾以內(nei) 進行。
注意事項：
．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡530分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在 5 分鍾內(nei) ，如標本數量多，使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於(yu) 標準品孔孔的 OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定， 計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5） 。
5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。