技術分析：
貨號：QY-R2767
英文名稱：Rat Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF ELISA Kit
類別：酶聯免疫分析檢測試劑盒
規格：96T/48T
包裝：盒
檢測原理：采用雙抗夾心法
保質期：六個(ge) 月
產(chan) 品保存條件：2-8°C
應用範圍：僅(jin) 供科研研究實驗使用
樣品形式：血清/血漿/組織勻漿/細胞培養(yang) 上清//其它生物液體(ti) （具體(ti) 情況請谘詢）
標本的采集及保存：
.血清：室溫血液自然凝固0-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存  過程 中  如有沉澱形成，應再次離心。
2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為(wei) 抗凝劑，混合0-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
3.尿液：用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細胞培養(yang) 上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。  檢測細胞內(nei) 的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到00萬(wan) /ml左右。通過反複凍融，以 使細胞破壞並 放出細胞內(nei) 成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
5.組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。
標本要求： 
．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
需要自備的試劑和器材：
.37℃恒溫箱。
2.標準規格酶標儀(yi) 。
3.精密移液器及一次性吸頭
4.蒸餾水，
5.一次性試管
6.吸水紙
操作步驟：
、標準品的稀釋：在酶標包被板上設標準品孔0孔，在*、第二孔中分別加標準品00μl，然後在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然後從(cong) *孔、第二孔中各取00μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從(cong) 第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從(cong) 第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從(cong) 第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為(wei) 50μl，濃度分別為(wei) 9mmol/L，6 mmol/L，3 mmol/L，.5mmol/L， 0.75 mmol/L）。
2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品0μl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3、溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鍾. 
0、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後5分鍾以內(nei) 進行。
洗板方法：
手工洗板方法：甩掉酶標板內(nei) 的液體(ti) ；在實驗台上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋後的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nei) ，浸泡-2分鍾。根據需要，重複此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。
注意事項：
試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在5分鍾內(nei) ，如標本數量多，使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於(yu) 標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。
底物請避光保存。
嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
本試劑不同批號組分不得混用。
如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。