實驗原理 ：
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中小鼠白細胞介素 8（IL-8）水平。用純化的小鼠
白細胞介素 8（IL-8）抗體(ti) 包被微孔板，製成固相抗體(ti) ，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素 8（IL-8），再與(yu) HRP 標記的白細胞介素 8（IL-8）抗體(ti) 結合，形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素 8（IL-8）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠白細胞介素 8（IL-8）濃度。
試劑盒組成：
試劑盒組成  48 孔配置  96 孔配置  保存
說明書(shu)   份   份 
封板膜  2 片（48）  2 片（96） 
密封袋   個(ge)   個(ge)  
酶標包被板  ×48  ×96  2-8℃保存
標準品：35pg/mL  0.5ml× 瓶  0.5ml× 瓶  2-8℃保存
標準品稀釋液  .5ml× 瓶  .5ml× 瓶  2-8℃保存
酶標試劑  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
樣品稀釋液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
顯色劑 A 液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
顯色劑 B 液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
終止液  3ml× 瓶  6ml× 瓶  2-8℃保存
20 倍濃縮洗滌液  20ml× 瓶  30ml× 瓶  2-8℃保存
樣本處理及要求：
.血清：室溫血液自然凝固 0-20 分鍾，離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。
2.血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為(wei) 抗凝劑，混合 0-20 分鍾後，離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yang) 上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nei) 的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 00 萬(wan) /ml 左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。離心 20 分鍾2左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
5.組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用。
操作步驟
.  標準品的稀釋與(yu) 加樣：在酶標包被板上設標準品孔 0 孔，在*、第二孔中分別加標準品 00µl，然後在*、第二孔中加標準品稀釋液 50µl，混勻；然後從(cong) *孔、第二孔中各取 00µl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50µl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取 50µl 棄掉，再各取 50µl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻後從(cong) 第五、第六孔中各取 50µl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50µl，混勻後從(cong) 第七、第八孔中分別取 50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50µl，混勻後從(cong) 第九第十孔中各取 50µl 棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為(wei) 50µl，濃度分別為(wei) 90 pg/mL，60 pg/mL ，30 pg/mL，5 pg/mL，7.5 pg/mL）。
2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然後再加待測樣品 0µl（樣品zui終稀釋度為(wei) 5 倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。
4.  配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋後備用。
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此重複 5 次，拍幹。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同 3。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5 分鍾.
0. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液後 5 分鍾以內(nei) 進行。
注意事項 ：
． 試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 5-30 分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在 5 分鍾內(nei) ，如標本數量多，使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值大於(yu) 標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
0. 如與(yu) 英文說明書(shu) 有異，以英文說明書(shu) 為(wei) 準。
計算 ：
以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD 值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的 OD
值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu) OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。
試劑盒性能 ：
.樣品線性回歸與(yu) 預期濃度相關(guan) 係數 R 值為(wei) 0.990 以上。
2.批內(nei) 與(yu) 批見應分別小於(yu) 9%和 %
檢測範圍 ：
5 pg/mL -00 pg/mL
保存條件及有效期 ：
.試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6 個(ge) 月