​羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟

實驗方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物1(10pM)                 

2 μl     引物2(10pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀(yi) 有無熱蓋,不加或添加石蠟油。

2調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀(yi) 上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保溫7min。

3結束反應,PCR產(chan) 物放置於(yu) 4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl氯仿進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

小鼠神經幹細胞（EGFP標記）

人腦微血管內(nei) 皮細胞

人腦血管平滑肌細胞

人海馬神經元

人少突膠質細胞

人星形膠質細胞

小鼠成纖維細胞（EGFP標記）

mCF, 小鼠心髒成纖維細胞

MN-c, 小鼠皮質神經元

MN-h, 小鼠海馬神經元

MSC, 小鼠雪旺細胞

MA, 小鼠星形膠質細胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

CSC, 小鼠心肌細胞

mEPC, 小鼠內(nei) 皮祖細胞-骨髓

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞

NSC，大鼠神經幹細胞

RN-h, 大鼠海馬趾神經元

rEPC，大鼠內(nei) 皮祖細胞-骨髓

RN-c, 大鼠皮質神經元

RN-s, 大鼠紋狀體(ti) 神經元

RSC, 大鼠雪旺細胞

RA, 大鼠星形膠質細胞

RLF, 大鼠淋巴成纖維細胞

rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞

rCSC, 大鼠心肌細胞

RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞

RLFs, 大鼠肺成纖維細胞

rCF, 大鼠心髒成纖維細胞

MN-h, 小鼠海馬神經元

MN-s, 小鼠紋狀體(ti) 神經元

mOPC, 小鼠少突膠質前體(ti) 細胞

MA, 小鼠星形膠質細胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

CSC, 小鼠心肌細胞

小鼠骨髓間充質幹細胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞