,25二羥基檢測試劑盒操作步驟

操作步驟：

. 標準品的稀釋與(yu) 加樣：在酶標包被板上設標準品孔0孔，在di一、第二孔中分別加標準品00μl，然後在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然後從(cong) di一孔、第二孔中各取00μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從(cong) 第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從(cong) 第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從(cong) 第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為(wei) 50μl，濃度分別為(wei) 80 ng/L，20 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，5 ng/L）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品0μl（樣品最終稀釋度為(wei) 5倍）。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鍾.

0. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後5分鍾。

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