大鼠肺成纖維樣細胞；RL生長特性​複蘇操作要點

複蘇操作要點：

）將培養(yang) 基在37℃水浴鍋預熱；準備一個(ge) 5mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yang) 基。

2）將凍存細胞從(cong) 液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中複溫（可準備一潔淨的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出後迅速放入燒杯內(nei) ，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在~2min內(nei) *解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起汙染。

3）用75%酒精擦拭凍存管後再置於(yu) 超淨台內(nei) ，將管內(nei) 細胞轉移至準備好的離心管內(nei) ，輕輕吹打液體(ti) ，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chan) 生氣泡。用新鮮培養(yang) 基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nei) 。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yang) 基，吹打製成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nei) ，補加適量的培養(yang) 基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nei) 培養(yang) 。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yang) 基以去除死細胞。繼續培養(yang) ，待細胞長至80~90%匯合時正常傳(chuan) 代。一般剛複蘇的細胞需經過2~3次傳(chuan) 代，細胞活力恢複後才能進行後續的實驗。

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