柯薩奇病毒A24型PCR檢測試劑盒檢測方法

檢測方法：​
.Ⅰ法：
在PCR反應體(ti) 係中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈後，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(hui) 發射任何熒光信號，從(cong) 而保證熒光信號的增加與(yu) PCR產(chan) 物的增加*同步。
定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chan) 物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從(cong) 而熒光監測係統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個(ge) 熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與(yu) PCR產(chan) 物的形成*同步。
取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鍾使其*溶解。
②兩(liang) 相分離 每ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體(ti) 5秒後，5到30℃孵育2到3分鍾。4℃下2000rpm離心5分鍾。離心後混合液體(ti) 將分為(wei) 下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配於(yu) 水相中。水相上層的體(ti) 積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉澱 將水相上層轉移到一幹淨無RNA酶的離心管中。加等體(ti) 積yibing醇混合以沉澱其中的RNA，混勻後5到30℃孵育0分鍾後，於(yu) 4℃下2000rpm 離心0分鍾。此時離心前不可見的RNA沉澱將在管底部和側(ce) 壁上形成膠狀沉澱塊。
④RNA清洗 移去上清液，每mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少ml的75%yi醇(75%yi醇用DEPCH2O配製)，清洗RNA沉澱。混勻後，4℃下7000rpm離心5分鍾。
⑤RNA幹燥 小心吸去大部分yi醇溶液，使RNA沉澱在室溫空氣中幹燥5-0分鍾。
⑥溶解RNA沉澱 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反複吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存於(yu) -80℃待用。 )紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然後取少量RNA溶液用TE稀釋(:00)後，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。