腺伴隨病毒PCR試劑盒的PCR反應條件設置

的PCR反應條件設置：

a）預變性：95℃，5 min可以讓白細胞裂解，釋放可用於(yu) PCR擴增的基因組DNA。請勿縮短時間或降低溫度。

b）退火溫度：退火溫度設置為(wei) 引物Tm值即可。然而，使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴增，並提高全血模板的擴增效率。因此，如擴增產(chan) 物特異性較差，可以建立一個(ge) 溫度梯度反應去尋找引物模板zui適退火溫度。

c）延伸時間：按30 sec/kb設定，如不足30 sec，設置30 sec即可。

d）擴增循環數：35個(ge) 循環已可以擴增足量產(chan) 物。太多的循環將會(hui) 導致非特異性擴增增加。

PCR完成後，建議將反應液於(yu) 000× g (大約4000 rpm) 離心～3 min以沉澱血細胞碎片，之後取上清進行下遊分析。該步驟可有效去除多種血液組分。當使用高濃度血液模板時此步尤為(wei) 重要，因為(wei) 經過PCR循環，反應管中會(hui) 存在大量的血細胞碎片。這些碎片會(hui) 幹擾下遊的檢測，如瓊脂糖電泳檢測。注意：由於(yu) 血液本身的原因，PCR 結束後在 PCR 管的底部會(hui) 出現透明凝膠狀物質，此為(wei) 正常現象。