裸鼠白細胞介素hth体育下载地址固體樣本的收集

固體(ti) 樣本的收集 :

、組織標本：切割標本後，稱取 g 組織，加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分），仔細收集上清。分裝一 份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。對於(yu) 植物組織，不好勻漿的話，就在液氮中充分研磨。

2、細胞內(nei) 蛋白樣本：許多待測蛋白不是分泌蛋白，而是存在於(yu) 細胞內(nei) 的蛋白，這個(ge) 時候，要先收集細胞，洗滌幹淨，再破碎細胞，離心取上清。

（）培養(yang) 的細胞

A、動物細胞：用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到 00 萬(wan) /ml 左右。通過反複凍融（如果反複凍融，破碎效果不好，就采用超聲波破碎），以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。2-8℃條件離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

B、植物細胞：用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到 00 萬(wan) /ml 左右，置於(yu) 冰盒上，用超聲破碎儀(yi) ，設置破碎 2s，冷卻 30s 的方式，充分破碎細胞，以使細胞破壞並放出細胞內(nei) 成份。2-8℃條件離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

（2）組織的細胞

切割標本後，稱取 g 組織，加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分），去除上清，再用 pH7.2-7.4左右的 PBS 小心洗滌沉澱的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。

3、細胞內(nei) 蛋白樣本：許多待測蛋白不是分泌蛋白，而是存在於(yu) 細胞內(nei) 的蛋白，這個(ge) 時候，要先收集細胞，洗滌幹淨，再破碎細胞，離心取上清。

4、咽拭子：加入 2ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS，溶解咽拭子頭部，搖勻，用鑷子取出咽拭子並擠幹液體(ti) ，2-8℃條件離心 20 分鍾左右（2000-3000 轉/分），仔細收集上清。分裝一份待檢測，其餘(yu) 冷凍備用，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。如果是測分泌蛋白，直接取上清檢測，測試細胞內(nei) 蛋白，要破碎細胞。

5、植物標本：取組織塊（0.2g～0.5g）少可到 5～0mg 在冰冷的 PBS 中漂洗，濾紙拭幹，準確稱重，放入 5ml 的勻漿管中；按重量(mg):體(ti) 積(ml)=:9 的比例加入 9 倍體(ti) 積的勻漿介質於(yu) 勻漿管中，冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊；勻漿的方式：手工勻漿，機器勻漿。 ① 手工勻漿：左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗杆垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8 分鍾），充分研碎，製成 20%的勻漿液。 ② 機器勻漿：用組織搗碎機 0000～5000 轉/分 上下研磨製成 0%組織勻漿，也可用內(nei) 切式組織勻漿機製備（勻漿時間 0 秒/次，間隙 30 秒，連續 3～5 次，在冰水中進行,可適當延長勻漿時間），鏡檢觀察:取少量組織勻漿作塗片（直接塗片、染色均可以），顯微鏡下觀察細胞是否破碎，若沒有則可延長勻漿時間。將製備好的 0%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機 4000 轉/分左右,離心 0～5 分鍾，取上清液進行測定。