鮑球狀病毒PCR定量試劑盒組成及試劑配製

 鮑球狀病毒PCR定量試劑盒組成及試劑配製:

、酶標板：一塊（96孔）

2、 標準品（凍幹品）： 2瓶，請臨(lin) 用前5分鍾內(nei) 配製。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好後室溫靜置大約0分鍾，同時反複顛倒/搓動以助溶解，其濃度為(wei) 200 U/L，然後做係列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配製成200 U/L，00 U/L，50 U/L，25 U/L，2.5 U/L，6.25 U/L，3.2 U/L，樣品稀釋液直接作為(wei) 空白孔 0 U/L。如配製00 U/L標準品：取0.3ml （不要少於(yu) 0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其餘(yu) 濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液：×20ml。

4、 檢測稀釋液A：×0ml。

5、 檢測稀釋液B：×0ml。

技術原理:

DNA的半保留複製是生物進化和傳(chuan) 代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與(yu) 啟動子的參與(yu) 下，根據堿基互補配對原則複製成同樣的兩(liang) 分子挎貝。

在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以複性成為(wei) 雙鏈。因此，通過溫度變化控製DNA的變性和複性，並設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體(ti) 外複製。（ DNA高溫變性低溫複性）

發現耐熱DNA聚合同酶－－Taq酶對於(yu) PCR的應用有裏程碑的意義(yi) ，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(ge) 循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，並逐步應用於(yu) 臨(lin) 床。