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．邊緣效應 使用96孔板的ELISA測定中，常發現有“邊緣效應"，即外周孔顯色較中心孔深。經研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為(wei) 不良熱導體(ti) ，在實驗室的常規ELISA測定中，將板從(cong) 室溫（通常在25℃左右）置於(yu) 37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與(yu) 中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應"，並且可提高測定的重複性。 
2．加樣在現在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guan) 鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chan) 生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易導致非特異吸附。濺出會(hui) 對鄰近孔產(chan) 生汙染。出現氣泡則反應液界麵有差異。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為(wei) 陽性，下次測定為(wei) 陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。