hth体育下载地址方法測定抗體原理及操作步驟

        在運用方法測定抗體(ti) 方麵，通常所用的方法稱為(wei) 間接法，也是目前zui常用的方法，其原理：間接法首先用抗原包被於(yu) 固相載體(ti) ，這些包被的抗原必須是可溶性的，或者至少是極微小的顆粒，經洗滌，加入含有被測抗體(ti) 之標本，再經孵育洗滌後，加入酶標記抗抗體(ti) ，(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM)，再經孵育洗滌後，加底物顯色,底物降解的量，即為(wei) 欲測抗體(ti) 的量，其結果可用目測或用分光光度計定量測定。

操作步驟：

.將抗原按5 μg/ml稀釋於(yu) 碳酸鹽緩衝(chong) 液(pH 9.6)，00 μl /孔，4℃過夜。

2.加2％BSA封閉室溫 h，200 μl /孔。

3.次日PBS－T清洗4次(快慢3，間隔5分鍾)。

4.陽性對照從(cong) 0ug/ml，做倍必稀釋，待測血清從(cong) ：50做倍比稀釋，預試驗後確定稀釋倍數及陽性對照的起始濃度及稀釋數量（以可以做標準曲線為(wei) 參數），室溫h。

5.PBS－T清洗4次(快慢3，間隔5分鍾)。

6.PBS－T清洗4次(快慢3，間隔5分鍾)。

7.加入：3000（不同公司有不同的稀釋度） PBS－T稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG，00 μl /孔，室溫h。

8.顯色，00 μl /孔，顏色變深後中止顯色，2M硫酸在BIO－RAD酶標儀(yi) 上讀數，可用ABTS，OPD，TMB等