ELISA法在生物醫學各領域的應用範圍日益擴大，可概括四個方麵

       法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用於(yu) 多種病原微生物所引起的傳(chuan) 染病、寄生蟲病及非傳(chuan) 染病等方麵的免疫診斷。也已應用於(yu) 大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據已經使用的結果，認為(wei) ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易於(yu) 自動化操作等特點。不僅(jin) 適用於(yu) 臨(lin) 床標本的檢查，而且由於(yu) 一天之內(nei) 可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合於(yu) 血清流行病學調查。本法不僅(jin) 可以用來測定抗體(ti) ，而且也可用於(yu) 測定體(ti) 液中的循環抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用範圍日益擴大，可概括四個(ge) 方麵： 、免疫酶染色各種細胞內(nei) 成份的定位。 2、研究抗酶抗體(ti) 的合成。 3、顯現微量的免疫沉澱反應。 4、定量檢測體(ti) 液中抗原或抗體(ti) 成份。

基本方法一 用於(yu) 檢測未知抗原的雙抗體(ti) 夾心法:

. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩衝(chong) 液將抗體(ti) 稀釋至蛋白質含量為(wei) ～0μg／ml。在每個(ge) 聚苯乙烯板的反應孔中加0.ml，4℃過一夜。次日，棄去孔內(nei) 溶液，用洗滌緩衝(chong) 液洗3次，每次3分鍾。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.ml於(yu) 上述已包被之反應孔中，置37℃孵育小時。然後洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體(ti) ：於(yu) 各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(ti) （經滴定後的稀釋度）0.ml。37℃孵育0.5～小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分鍾。
5. 終止反應：於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定：可於(yu) 白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nei) 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為(wei) 無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀(yi) 上，於(yu) 450nm（若以ABTS顯色，則40nm）處，以空白對照孔調零後測各孔O·D值，若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.倍，即為(wei) 陽性。

基本方法二 用於(yu) 檢測未知抗體(ti) 的間接法：
用包被緩衝(chong) 液將已知抗原稀釋至～0μg／ml，每孔加0.ml，4℃過一夜。次日洗滌3次。
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加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體(ti) ）0.ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃孵育小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）
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於(yu) 反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(ti) （抗抗體(ti) ）0.ml，37℃孵育30-60分鍾，洗滌,zui後一遍用DDW洗滌。
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其餘(yu) 步驟同“雙抗體(ti) 夾心法”的4、5、6。