雌二醇Elisa試劑盒的原理及操作步驟

　　雌二醇Elisa試劑盒中的雌二醇是卵巢分泌的類固醇激素，是主要的雌性激素，負責調節女性特征、附屬性器官的成熟和月經-排卵周期，促進乳腺導管係統的產生，雌二醇是人體一種重要的黃體解體劑，雌二醇主要是卵巢濾泡和胎盤的睾酮合成的，在腎髒也能合成少許，睾酮與雌二醇的轉換是芳香酶係統完成的，血漿中雌二醇是一種動態過程。

　　將雌二醇抗體包被於96孔微孔板中，製成固相載體，向微孔中分別加入標準品或標本，其中的雌二醇與連接於固相載體上的抗體結合，然後加入化的雌二醇抗體，將未結合的化抗體洗淨後，加入HRP標記的親和素，再次*洗滌後加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度，計算樣品濃度。

　　加一定稀釋的待檢樣品0.ml於雌二醇Elisa試劑盒中，置37℃孵育小時。然後洗滌，同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔。

　　用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩衝液將抗體稀釋至蛋白質含量為～0μg/毫升。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.ml，4℃過一夜。次日棄去孔內溶液，用洗滌緩衝液洗3次，每次3分鍾。

　　加酶標抗體於各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定後的稀釋度）0.毫升。37℃孵育0.5～小時，洗滌。

　　加底物液顯色：於各反應孔中加入臨時配製的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分鍾。

　　終止反應於各反應孔中加入2M硫酸0.05毫升。