雙抗夾心 hth体育下载地址的反應時間

 雙抗夾心的反應時間

   在保證 ELISA 有效檢測病原菌的前提下，快速、方 便也是雙抗夾心 ELISA 的必要條件。雙抗夾心 ELISA 從(cong) 加入待測抗原到得出結果，檢測大腸杆菌 O57:H7 共需 要 5h 左右，而間接 ELISA 則需要 7h(包被 37℃，2h)或 者 7h(包被 4℃guo夜)。本論文篩選出的雙抗夾心 ELISA 檢測大腸杆菌 O57:H7 省去封閉這一步驟。在間接 ELISA 測定抗原中，封閉一般是*的，因為(wei) 包 被不同濃度抗原不一定可以*覆蓋固相載體(ti) 表麵，如 果不封閉，很可能使隨後加入的特異性抗體(ti) 和酶標二抗 直接被吸附到固相載體(ti) 上，產(chan) 生非特異性顯色而使檢測 結果偏高。但是對於(yu) 雙抗體(ti) 夾心 ELISA 來說，在包被 捕獲抗體(ti) 時已經使固相載體(ti) 飽和，已經沒有多餘(yu) 的吸附 力來吸附隨後加入的特異性抗體(ti) 和酶標二抗，這都說明 了雙抗夾心 ELISA 有不需要封閉的可能，通過正交試驗 結果也證明不封閉可以達到理想實驗效果，而且還縮短 了整個(ge) 檢測流程和時間，說明隻要酶標記物是高活性的 並且操作時洗滌*，不經封閉也可得到滿意結果。雙抗夾心 ELISA 檢測法的特異性和靈敏性 抗原抗體(ti) 的結合實際上隻發生在抗原的抗原決(jue) 定簇與(yu) 抗體(ti) 的抗原結合位點之間，由於(yu) 兩(liang) 者在化學結構和空 間構型上呈互補關(guan) 係，所以抗原抗體(ti) 反應具有高度的特 異性。但這種特異性並不是的，假使兩(liang) 種化合物 有著部分相同的結構，在抗原抗體(ti) 反應中可能出現交叉 反應。本實驗以大腸杆菌 O57:H7 及其他菌株共 0 株作 為(wei) 抗原用來檢測本方法的特異性，結果顯示大腸杆菌 O57:H7 呈明顯陽性反應，其餘(yu) 各菌株均呈陰性反應， 說明本方法對大腸杆菌 O57:H7 具有明顯的檢測特異 性，而對所測定的其它菌株無交叉反應。

   本論文所建立的雙抗夾心 ELISA 方法對純培養(yang) 的 大腸杆菌 O57:H7 檢出限均05CFU/ml，Kerr 和 Chart 等[6]建立的雙抗夾心 ELISA 檢測大腸杆菌 O57:H7 的檢測限為(wei) 0 5 CFU/ml ，趙誌晶和劉秀梅[7] 建立的雙抗夾心ELISA 檢測大腸杆菌 O57:H7 的檢測限為(wei) 04CFU/ml，兩(liang) 者均用單克隆抗體(ti) 作為(wei) 檢測抗體(ti) ，而本方法使用 IgY 抗 體(ti) 與(yu) 兔多克隆抗體(ti) ，製備相對比單克隆抗體(ti) 簡單，對試 劑、成本要求也相對降低，其效果基本達到檢測要求。