ELISA方法的基本類型和操作程序分析

hth体育下载地址價(jia) 格根據ELISA所用的固相載體(ti) 而區分為(wei) 三大類型：一是采用聚苯乙烯微量板為(wei) 載體(ti) 的ELISA，即我們(men) 通常所指的ELISA（微量板ELISA）；另一類是用硝酸纖維膜為(wei) 載體(ti) 的ELISA,稱為(wei) 斑點ELISA（Dot-ELISA）;再一類是采用疏水性聚脂布作為(wei) 載體(ti) 的ELISA，稱為(wei) 布ELISA（C－ELISA）。在微量板ELISA中，又根據其性質不同分為(wei) 間接ELISA、雙抗體(ti) 夾心ELISA、雙夾心ELISA、競爭(zheng) ELISA、阻斷ELISA及抗體(ti) 捕捉ELISA。

ELISA方法的基本類型有以上8種，常用的有間接ELISA法、雙抗體(ti) 夾心ELISA法和雙夾心ELISA法三種：

.間接ELISA

hth体育下载地址價(jia) 格本法主要用於(yu) 檢測抗體(ti) 。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體(ti) 的ELISA為(wei) 例，間接ELISA的操作程序如下。 （） 材料 　　① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液； 　　② DVH包被抗原、酶標抗抗體(ti) 、陰性及陽性DVH參考血清；待檢鴨血清； 　　③ ELISA檢測儀(yi) 、加樣器、聚苯乙烯微量板。 　　（2） 方法步驟 　　① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋幹 　　② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋幹 　　③ 加酶標抗體(ti) → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋幹 　　④ 加底物液　→ 37℃ 30分鍾，加終止液 　　⑤ 用ELISA檢測儀(yi) 測定OD值，並計算出P/N比值。 　　（3） 結果判定　已知陽性血清與(yu) 已知陰性血清的比值（P/N）≥2.，而且已知陽性血清的OD值≥0.4；在上述條件成立的情況下，如果待檢血清與(yu) 已知陰性血清的比值（P/N）≥2.，而且待檢血清的OD值≥0.4，則判為(wei) 陽性，否則判為(wei) 陰性。

2.雙抗體(ti) 夾心ELISA

本法主要用於(yu) 檢測大分子抗原。現以檢測雞傳(chuan) 染性法氏囊病病毒（IBDV）的雙夾心抗體(ti) ELISA為(wei) 例介紹本法的操作程序。 　　① 加抗體(ti) 包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋幹 　　② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鍾，洗滌三次、拋幹 　　③ 加酶標抗體(ti) → 37℃ 30分鍾，洗滌三次、拋幹 　　④ 加底物液　→ 37℃ 5分鍾，加終止液 　　⑤ 用ELISA檢測儀(yi) 測定OD值。

3.雙夾心ELISA

hth体育下载地址價(jia) 格此法與(yu) 雙抗體(ti) 夾心ELISA的主要區別在於(yu) ：它是采用酶標抗抗體(ti) 檢查多種大分子抗原，它不僅(jin) 不必標記每一種抗體(ti) ，還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為(wei) ： 　　① 加抗體(ti) （Ab-）包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋幹 　　② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鍾，洗滌三次、拋幹 　　③ 加用非同種動物生產(chan) 的特異性抗體(ti) （Ab-2）→ 37℃ 60分鍾，洗滌三次、拋幹 　　④ 加入酶標抗Ab-2抗體(ti) （AB-3）→ 37℃ 60分鍾，洗滌三次、拋幹 　　⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鍾，加終止液 ⑥ 用ELISA檢測儀(yi) 測定OD值。