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洗滌很重要
洗滌步驟看似很無聊，國產(chan) hth体育下载地址其實很重要，因為(wei) 如果未結合的材料(如非特異結合的抗體(ti) 或檢測試劑)殘留在微孔板中，那麽(me) 它會(hui) 增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(hui) 阻止非特異結合反應。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嚐試增加洗滌次數。
封閉更關(guan) 鍵
封閉液的作用是讓不相關(guan) 的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產(chan) 生信號的抗體(ti) 非特異結合的機會(hui) 。您當然也希望抗體(ti) 隻與(yu) 目的蛋白結合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那麽(me) 您可以嚐試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
如果您一直被背景問題所困擾，那麽(me) 也許您該花些時間來優(you) 化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩(liang) 種類型的封閉液：蛋白和非離子型去汙劑。您使用的類型須取決(jue) 於(yu) 多個(ge) 因素，包括微孔板的表麵試劑、吸附的抗原、您的抗體(ti) 和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與(yu) 抗原、抗體(ti) 或檢測試劑發生相互作用。
zui常用的非離子型去汙劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩定，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們(men) 隻在存在時起作用，因為(wei) 很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為(wei) 0.0-0.%)，它會(hui) 降低特異結合，產(chan) 生假陰性。另一個(ge) 選擇是使用蛋白和非離子型去汙劑這兩(liang) 種封閉液，後者可協助洗滌過程中的封閉。
蛋白封閉液則有所不同，是*的。它們(men) 與(yu) 開放位點結合並封閉，同時穩定與(yu) 微孔板結合的抗原分子。國產(chan) hth体育下载地址常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nei) 在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過，它的缺點在於(yu) 能與(yu) Protein A和IgG抗體(ti) 相互作用。解決(jue) 這個(ge) 問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。
抗體(ti) 濃度須優(you) 化
但是如果試劑稍有不同，則可能需要優(you) 化抗體(ti) 的量。記住，非特異的抗體(ti) 結合會(hui) 增加背景。為(wei) 了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
檢測試劑要適量
另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會(hui) 導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(you) 化一下何時應加入終止液。