hth体育下载地址如何選擇*化的包被條件?

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.包被抗原的選擇
包被抗原可分為(wei) 天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經純化才能用直接吸附法包被，對於(yu) 含雜質較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與(yu) 目的抗原反應的物質如抗體(ti) 直接吸附在酶標板上，再通過特異性反應使抗原固相化)。經純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由於(yu) 分子量太小，往往難於(yu) 直接吸附在酶標板上，一般都先使其與(yu) 無關(guan) 蛋白質如BSA等偶聯，偶聯物吸附於(yu) 固相載體(ti) 上。
2.包被液的選擇
一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩衝(chong) 液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩衝(chong) 液。
3.包被溫度的選擇
通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時，我們(men) 強烈建議4-8度條件下包被，有利於(yu) 蛋白活性的保持。
4.包被濃度的選擇
包被的zui適濃度隨固相載體(ti) 和包被物的性質變化，一般蛋白質的包被濃度為(wei) -5ug/ml，要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實驗來確定。
包板後需要封閉嗎?應該選擇什麽(me) 樣的封閉體(ti) 係?
封閉是否必要，取決(jue) 於(yu) ELISA的模式及具體(ti) 的實驗條件。一般說來，雙抗體(ti) 夾心法，隻要酶標記物是高活性的，操作時洗滌*，不經封閉也可得到滿意的結果。而在間接法測定中，封閉一般是*的。
常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、0%的小牛血清、%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART使用5%脫脂奶粉，價(jia) 廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉隻適合短期內(nei) 使用，不宜保存，所以試劑盒中較少使用。