細胞凋亡檢測操作步驟之ELISA法

細胞凋亡發生時，內(nei) 源性核酸內(nei) 切酶將分解核小體(ti) 區間的雙鏈DNA，但核小體(ti) 本身由於(yu) 由組蛋白緊密結合而免受切割，單克隆抗體(ti) 可以與(yu) 核小體(ti) 形成夾心結構，可通過檢測核小體(ti) 判斷細胞是否經曆凋亡事件。
(一) 原理
細胞凋亡的發生，是由於(yu) 鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體(ti) 間切割DNA,產(chan) 生80bp～200bp或其倍數的核小體(ti) 片段。而核小體(ti) 由於(yu) 與(yu) 組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密複合物而不被核酸內(nei) 切酶切割。采用雙抗體(ti) 夾心酶免疫法，應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體(ti) ，與(yu) 核小體(ti) 片段形成夾心結構，可特異性檢測細胞溶解物中的核小體(ti) 片段。
(二)材料與(yu) 試劑
.采用Boehringer Mannheim公司試劑盒，生物標記的小鼠抗組蛋白單克隆抗
體(ti) 。
2.過氧化物酶(-POD)標記的小鼠抗DNA單克隆抗體(ti)
3.鏈黴親(qin) 合素包被的微孔板
4.DNA-組蛋白複合物，作為(wei) 陰性對照。
5.ABTS底物
6.溶解緩衝(chong) 液
7.溫育緩衝(chong) 液
8.底物緩衝(chong) 液
(三)樣品
.培養(yang) 細胞或離體(ti) 細胞的裂解物細胞裂解步驟：收集細胞，離心後，用200µl溶細胞緩衝(chong) 液重新懸浮，室溫下作用30min。
2.培養(yang) 細胞的上清液
3.血漿(血清)