、植物組織蛋白質提取方法
、根據樣品重量(g樣品加入3.5ml提取液,可根據材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。
2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨後加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。
3、用離心機離心8000rpm40min4℃或00rpm20min4℃
4、提取上清夜,樣品製備完成。
蛋白質提取液:300ml
、Mtris-HCl(PH8) 45ml
2、甘油(Glycerol)75ml
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳!
2、植物組織蛋白質提取方法
三氯醋酸—丙酮沉澱法
、在液氮中研磨葉片
2、加入樣品體(ti) 積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然後離心(4℃8000rpm以上小時)棄上清。
3、加入等體(ti) 積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇),搖勻後離心(4℃8000rpm以上小時),然後真空幹燥沉澱,備用。
4、上樣前加入裂解液,室溫放置30分鍾,使蛋白充分溶於(yu) 裂解液中,然後離心(5℃8000rpm以上小時或更長時間以沒有沉澱為(wei) 標準),可臨(lin) 時保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然後可分裝放入-80℃備用。
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