細胞培養參考

實驗室
   細胞培養(yang) 是一種無菌操作技術,要求工作環境和條件必須保證無微生物汙染和不受 其它有害因素的影響.細胞培養(yang) 室和設計原則是防止微生物汙染和有害因素影響,要求工作環境清潔,空氣清新,幹燥和無煙塵.細胞培養(yang) 室的設計原則一般是無菌操作區設在室內(nei) 較少走動的內(nei) 側(ce) ,常規操作和封閉培養(yang) 於(yu) 一室,而洗刷消毒在另一室.
2.常用設施及設備
  ⑴超淨工作台：也稱淨化工作台,分為(wei) 側(ce) 流式,直流式和外流式三大類.
  ⑵無菌操作間：一般由更衣間,緩衝(chong) 間和操作間三部分組成.操作間放置淨化工作台及二氧化碳培養(yang) 箱,離心機,倒置顯微鏡等.緩衝(chong) 間可放置電冰箱,冷藏器及消毒好的無菌物品等.
  ⑶操作間：普通培養(yang) 箱,離心機,水浴鍋,定時鍾,普通天平及日常分析處理物
  ⑷洗刷消毒間：烤箱,消毒鍋,蒸餾水處理器及酸缸等.
  ⑸分析間：顯微鏡,計算機及打印機等.
3.培養(yang) 器皿
   常用細胞培養(yang) 器皿有培養(yang) 瓶,培養(yang) 板,培養(yang) 皿等.常準備量是使用量的三倍.器皿應選擇透明度好,無毒,利於(yu) 細胞粘附和生長的材料,常用一次性聚苯乙烯材料製品或中性硬度玻璃製品.常用的器皿有下麵幾種.
  ⑴液體(ti) 儲(chu) 存瓶：用於(yu) 儲(chu) 存各種配製好的培養(yang) 液,血清等液體(ti) ,常用規格有500ml,250ml,00ml等幾種.
  ⑵培養(yang) 瓶：根據培養(yang) 細胞種類要求不同培養(yang) 瓶的形態各異,用於(yu) 細胞傳(chuan) 代培養(yang) 的細胞要求瓶壁厚簿均勻,便於(yu) 細胞貼壁生長和觀察,瓶口要大小一致,口徑一般不小於(yu) cm,允許吸管伸入瓶內(nei) 任何部位,規格有200ml,00ml,50ml,25ml,0ml等幾種.
  ⑶培養(yang) 皿：用於(yu) 開放式培養(yang) 及其它用途.分直徑30mm,60mm,20mm等幾種.
  ⑷吸管：常用的有長吸管和短吸管兩(liang) 類,長吸管也稱刻度吸管.其改良後管上部有球型刻度稱改良吸管,刻度吸管用於(yu) 移動液體(ti) .常用ml和0ml兩(liang) 種.短吸管也叫滴管,分彎頭和直頭兩(liang) 種.
  ⑸離心管：離心管是細胞培養(yang) 中使用zui廣泛的器皿,根據用途不同形態各樣,常用於(yu) 細胞培養(yang) 的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩(liang) 類.前者分別為(wei) 50ml,30ml,5ml；後者則多為(wei) 0ml和5ml.
  ⑹其它：如三角燒瓶,燒杯,量筒,漏鬥,注射器等.
4.細胞培養(yang) 溫度
    維持培養(yang) 細胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度.不同種類的細胞對培養(yang) 溫度要求也不同.人體(ti) 細胞培養(yang) 的標準溫度為(wei) 36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度範圍,細胞的正常代謝會(hui) 受到影響,甚至死亡.培養(yang) 細胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細胞代謝與(yu) 溫度成正比；人體(ti) 細胞在39-40℃小時,即能受到一定損傷(shang) ,但仍有可能恢複；在40-4℃小時,細胞會(hui) 普遍受到損傷(shang) ,僅(jin) 小半數有可能恢複；4-42℃小時,細胞受到嚴(yan) 重損傷(shang) ,大部分細胞死亡,個(ge) 別細胞仍有恢複可能；當溫度在43℃以上小時,細胞全部死亡.相反,溫度不低於(yu) 0℃時,對細胞代謝雖有影響,但並無傷(shang) 害作用；把細胞放入25-35℃時,細胞仍能生存和生長,但速度減慢；放在4℃數小時後,再回到37℃培養(yang) ,細胞仍能繼續生長.細胞代謝隨溫度降低而減慢.當溫度降至冰點以下時,細胞可因胞質結冰受損而死亡.但是,如果向培養(yang) 液中加入一定量的冷凍保護劑（二甲亞(ya) 碸或甘油）,可在深低溫下如-80℃或-96℃（液氮）保存.
5.合適的氣體(ti) 環境
   氣體(ti) 是哺乳動物細胞培養(yang) 生存必需條件之一,所需氣體(ti) 主要有氧氣和二氧化碳.氧氣參與(yu) 三羧酸循環,產(chan) 生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分.開放培養(yang) 時一般把細胞置於(yu) 95%空氣加5%二氧化碳混合氣體(ti) 環境中.二氧化碳既是細胞代謝產(chan) 物,也是細胞生長繁殖所需成分,它在細胞培養(yang) 中的主要作用在於(yu) 維持培養(yang) 基的pH值.大多數細胞的適宜pH為(wei) 7.2-7.4,偏離這一範圍對細胞培養(yang) 將產(chan) 生有害的影響.但細胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環境中更利於(yu) 細胞生長.但有一些細胞也喜歡偏堿環境中生長,如成纖維細胞pH是7.4-7.6.每種細胞都有其zui適pH值.