葉綠素的實驗步驟

    葉綠素（chlorophyll)是一類與(yu) 光合作用(photosynthesis)有關(guan) 的zui重要的色素。光合作用是通過合成一些有機化合物將光能轉變為(wei) 化學能的過程。葉綠素實際上存在於(yu) 所有能營造光合作用的生物體(ti) ，包括綠色植物、原核的藍綠藻（藍菌）和真核的藻類。葉綠素從(cong) 光中吸收能量，然後能量被用來將二氧化碳轉變為(wei) 碳水化合物。hth体育下载地址

一、原理

    根據葉綠體(ti) 色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與(yu) 其中溶質濃度C和液層厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常數。當溶液濃度以百分濃度為(wei) 單位，液層厚度為(wei) cm時，α為(wei) 該物質的吸光係數。各種有色物質溶液在不同波長下的吸光係數可通過測定已知濃度的純物質在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總吸光度等於(yu) 各組分在相應波長下吸光度的總和。這就是吸光度的加和性。今欲測定葉綠體(ti) 色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，隻需測定該提取液在三個(ge) 特定波長下的吸光度A，並根據葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光係數即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時為(wei) 了排除類胡蘿卜素的幹擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區的zui大吸收峰。hth体育下载地址

二、材料、儀(yi) 器設備及試劑

（一）材料：新鮮（或烘幹）的植物葉片。

（二）儀(yi) 器設備：. 分光光度計；2. 電子頂載天平（感量0.0g）；3. 研缽；4. 棕色容量瓶；5. 小漏鬥；6. 定量濾紙；7. 吸水紙；8. 擦境紙；9. 滴管。

（三）試劑：96％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸鈣粉。

三、實驗步驟

. 取新鮮植物葉片（或其它綠色組織）或幹材料，擦淨組織表麵汙物，剪碎（去掉中脈），混勻。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g，共3份，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇，研成均漿，再加乙醇0ml，繼續研磨至組織變白。靜置3～5min。3. 取濾紙張，置漏鬥中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏鬥中，過濾到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇衝(chong) 洗研缽、研棒及殘渣數次，zui後連同殘渣一起倒入漏鬥中。4. 用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體(ti) 色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為(wei) 止。zui後用乙醇定容至25ml，搖勻。5. 把葉綠體(ti) 色素提取液倒入光徑cm的比色杯內(nei) 。以95％乙醇為(wei) 空白，在波長665nm、649nm下測定吸光度。hth体育下载地址

四、實驗結果計算：將測定得到的吸光值代入下麵的式子：Ca=3.9665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。據此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度（Ca、Cb：mg/L），二者之和為(wei) 總葉綠素的濃度。zui後根據下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量：
葉綠素的含量（mg/g）= [葉綠素的濃度×提取液體(ti) 積×稀釋倍數]/樣品鮮重（或幹重）。