定性夾心免疫檢測技術

     ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自於(yu) 該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。

    將樣品或標準品加入孔中並孵育，如果其中存在HEV IgM抗體(ti) ，這些抗體(ti) 就會(hui) 與(yu) HEV 的多肽抗原結合，並固定在上麵，洗板除去其它非特異性抗體(ti) 和樣品中的其它成份。然後加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結合物，經第二次孵育後，酶結合物就會(hui) 與(yu) *次孵育結合上的HEV IgM抗體(ti) 相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會(hui) 發生酶-底物反應，隻有那些含有HEV IgM抗體(ti) 和酶結合物所形成的複合物的孔才會(hui) 發生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，並在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體(ti) elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大於(yu) 或等於(yu) Cut-Off值的樣品被認為(wei) 是初試陽性。

elisa技術流程

    ELISA的基礎是抗原或抗體(ti) 的固相化及抗原或抗體(ti) 的酶標記。結合在固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體(ti) 既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體(ti) 或抗原）與(yu) 固相載體(ti) 表麵的抗原或抗體(ti) 起反應。

    用洗滌的方法使固相載體(ti) 上形成的抗原抗體(ti) 複合物與(yu) 液體(ti) 中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體(ti) ，也通過反應而結合在固相載體(ti) 上。此時固相上的酶量與(yu) 標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物後，底物被酶催化成為(wei) 有色產(chan) 物，產(chan) 物的量與(yu) 標本中受檢物質的量直接相關(guan) ，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由於(yu) 酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 ELISA可用於(yu) 測定抗原，也可用於(yu) 測定抗體(ti) 。然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個(ge) 環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優(you) 點。