修飾性工具酶

修飾性工具酶

（一）末端轉移酶（terminal transferase）

l 末端轉移酶是一類不依賴於(yu) DNA模板的DNA聚合酶。hth体育下载地址

l 特性：該類酶可以在沒有模板鏈存在的情況下，將核苷酸連接到dsDNA或ssDNA的在3’－OH。特別是對於(yu) 平末端的雙鏈DNA末端加尾十分有用。

l zui常見的用途：給外源DNA片段及載體(ti) 分子加上互補的同聚物尾巴，以創造黏性末端，便於(yu) 重組。

（二） SI核酸酶（SI nuclease）

這是一種從(cong) 米曲黴（Aspergillus oryzae）中分離的高度單鏈特異的外切酶。

活性：可以降解單鏈DNA或RNA或雙鏈的單鏈區。

其主要用途有：

⑴　在cDNA合成過程中，切開cDNA的發夾末端；

⑵　載體(ti) 構建過程中，切去DNA片段的單鏈尾巴，hth体育下载地址

形成平末端結構。

（三）堿性磷酸酶

從(cong) 大腸杆菌中分離的細菌堿性磷酸酶（Bacterial Alkaline Phosphatase）簡稱BAP。

從(cong) 小牛腸中分離的叫小牛腸堿性磷酸酶（ Calf Intestinal Alkaline Phosphatase） ，簡稱CIP，用的廣泛。

酶催功能：

脫磷酸作用，將單鏈或雙鏈DNA或RNA5’－P轉化成5’－OH。

其主要用途有：

⑴在用32P標記DNA 5′端之前，去除5′端的磷；hth体育下载地址

⑵在DNA重組技術中，去除DNA片段的5′磷酸，防止載體(ti) 的自身環化，提高重組子比例。