重組體克隆的篩選與鑒定

重組體(ti) 克隆的篩選與(yu) 鑒定

    由體(ti) 外重組產(chan) 生的DNA分子，通過轉化、轉染、轉導等適當途徑引入宿主會(hui) 得到大量的重組體(ti) 細胞或噬菌體(ti) 。然而在這些眾(zhong) 多的重組體(ti) 中，會(hui) 有多種類型的DNA分子，其中包括：不帶任何外源DNA插入片段，僅(jin) 是由線性載體(ti) 分子自身連接形成的環狀DNA分子；由一個(ge) 載體(ti) 分子和一個(ge) 或數個(ge) 外源DNA片段構成的重組體(ti) DNA分子；單純由數個(ge) 外源DNA片段彼此連接形成的多聚DNA分子。當然zui後這類多聚DNA分子由於(yu) 不具備複製起點和複製基因，不能在轉化子中存留，zui後被消耗掉成為(wei) 無用的分子。盡管如此，麵對由這種混合的DNA製劑轉化而來的大量的克隆群體(ti) ，需要采用特殊的方法才能篩選出可能含有目的基因的重組體(ti) 克隆。同時也需要用某種方法檢測從(cong) 這些克隆中提取的質粒或噬菌體(ti) DNA，看其是否確實具有一個(ge) 插入的外源DNA片段。即便在這一問題得到了證實之後，也還不能肯定這些重組載體(ti) 所含有的外源DNA片段就一定是編碼所研究的目的基因的序列。為(wei) 解決(jue) 這一係列的問題，從(cong) 為(wei) 數眾(zhong) 多的轉化子克隆中分離出含有目的基因的重組體(ti) 克隆，需要建立一整套行之有效的特殊方法。

    目前已經發展和應用了一係列構思巧妙、可靠性較高的重組體(ti) 克隆檢測法，包括使用特異性探針的核酸雜交法、免疫化學法、遺傳(chuan) 檢測法和物理檢測法等。細胞

遺傳(chuan) 檢測法

    遺傳(chuan) 檢測法可分為(wei) 根據載體(ti) 表型特征和根據插入序列的表型特征選擇重組子兩(liang) 種方法。

根據載體(ti) 表型特征選擇重組體(ti) 分子的直接選擇法

    根據載體(ti) 分子所提供的表型特征直接選擇重組體(ti) DNA分子的遺傳(chuan) 選擇法是一種十分有效的方法，當它與(yu) 微生物學技術相配合時便可適用於(yu) 大量群體(ti) 的篩選。在基因工程中使用的所有的載體(ti) 分子都帶有一個(ge) 可選擇的遺傳(chuan) 標記或表型特征。質粒以及柯斯載體(ti) 具有抗藥性標記或營養(yang) 標記，而對於(yu) 噬菌體(ti) 來說，噬菌斑的形成則是它們(men) 的自我選擇特征。根據載體(ti) 分子所提供的遺傳(chuan) 特征進行選擇，是獲得重組體(ti) DNA分子群體(ti) 的*的條件之一。正如已經敘述過的，這種遺傳(chuan) 選擇法能將重組體(ti) 的DNA分子同非重組體(ti) 的親(qin) 本載體(ti) 分子區別開來。抗生素抗性選擇基因插入失活選擇，或者是諸如β-半乳糖苷酶基因一類的顯色反應，便是屬於(yu) 這種依據載體(ti) 編碼的遺傳(chuan) 特性選擇重組體(ti) 分子的典型方法。細胞