不同類型的樣本的處理方法

     通常我們(men) 可用於(yu) ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養(yang) 上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步。hth体育下载地址

、  血清

    血清是zui常用於(yu) ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。

    用無熱原、無內(nei) 毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個(ge) 晚上，使血清析出。（將試管或離心管傾(qing) 斜放置，使液麵橫截麵增大，能使血清更大程度的析出。）4℃ 000×g離心20分鍾，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。

    采血過程中應避免溶血，因為(wei) 紅細胞裂解時會(hui) 釋放具有過氧化酶活性的物質，在以HRP為(wei) 標記的ELISA檢測中會(hui) 有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌汙染，因為(wei) 菌體(ti) 內(nei) 可能含有內(nei) 源性的HRP從(cong) 而導致檢測的假陽性。

2、  血漿

    用含抗凝劑的或離心管采集血液標本，標本采集後30min內(nei) 4℃ 000×g離心5min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。

    常用的抗凝劑為(wei) EDTA、和等，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書(shu) ，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。hth体育下载地址

3、  細胞培養(yang) 上清

    取細胞培養(yang) 上清到離心管，000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。

4、  細胞裂解液

）  吸去培養(yang) 板內(nei) 的培養(yang) 基，用消化細胞，加適量培養(yang) 基將細胞從(cong) 培養(yang) 板上吹下來。懸浮細胞可省略。

2）  收集細胞懸液，000×g離心0min，棄去培養(yang) 基，用預冷的PBS潤洗3次。

3）  加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨(lin) 用前加入蛋白酶抑製劑）重懸細胞。通常6孔板一個(ge) 孔的細胞量需要50~250μL PBS重懸。

4）  將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反複凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。

5）  4℃ 0000×g 離心0min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。

5、組織勻漿液

）  將組織樣本用PBS (0.0 [錨點] [錨點] M, PH 7.4) 衝(chong) 洗，洗去組織表麵殘留的血液或雜質。

2）  將組織塊稱重，記錄後剪碎，碎塊應盡量小，便於(yu) 勻漿得更充分

3）  將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨(lin) 用前加入蛋白酶抑製劑）勻漿，勻漿時置於(yu) 冰上或冰浴中。（通常按組織重量：PBS體(ti) 積=:9的比例勻漿，例如g的組織樣本對應9mL的PBS，具體(ti) 體(ti) 積可根據實驗需要適當調整，檢測後計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數）

4）  吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~0min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。

6、  尿液、唾液等其他液體(ti) 生物樣本

000×g離心20min，取上清即可檢測。

    總的來說，因為(wei) ELISA隻能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均為(wei) 澄清的液體(ti) ，沉澱或懸浮物都應離心去除。hth体育下载地址

    為(wei) 了保證檢測的準確性，保存於(yu) -20℃或-80℃的樣本在~6個(ge) 月內(nei) 檢測；4℃保存的樣本應在周內(nei) 進行檢測。

    另外，還應保證樣本不含NaN3，因為(wei) NaN3會(hui) 抑製HRP的活性，從(cong) 而導致假陰性的結果。