培養細胞遺傳學的檢測技術

    細胞培養(yang) 是體(ti) 外研究細胞生物學性狀、遺傳(chuan) 學及分子生物學特性zui直接有效的手段。培養(yang) 細胞遺傳(chuan) 學的主要檢測技術，包括性染色體(ti) 的檢測、染色體(ti) 顯示、染色體(ti) 顯帶及染色體(ti) 基因定位等。對培養(yang) 細胞的分子生物學檢測主要包括細胞DNA檢測、RNA檢測及蛋白質的檢測，而相關(guan) 的生物學檢測主要包括細胞酶學檢測及細胞凋亡的檢測。

    組織培養(yang) 細胞是研究細胞遺傳(chuan) zui便利、zui有效的方法和對象；也是揭示培養(yang) 細胞性狀的重要方麵。具有46條染色體(ti) 數就是用細胞培養(yang) 法所確定出來的。當前已發展出染色體(ti) 分帶、姊妹染色單體(ti) 分化染色、染色體(ti) 原位雜交等多種技術。近年染色體(ti) 熒光基因標記法又獲得迅速發展，使基因作為(wei) 實體(ti) 得以在染色體(ti) 上顯現，從(cong) 而*染色體(ti) 和分子遺傳(chuan) 學之間的空白。染色體(ti) 的研究已成為(wei) 組織培養(yang) 技術中重要組成部分。

一、性染色體(ti) 檢測

(一)原理

    在間期細胞核中，女性x染色質和男性Y染色質均可用特殊染色法顯示出來。女性的兩(liang) 個(ge) x染色體(ti) 中的一個(ge) ，在間期時的染色質呈異固縮(heteropycnosis)，呈深染的小體(ti) 稱Barr氏體(ti) (圖9—)。Barr氏體(ti) 位於(yu) 問期細胞核內(nei) 麵，呈三角形或半月形小體(ti) ，易為(wei) 碳酸複葒等染料著色。正常女性Barr氏體(ti) 陽性，男性為(wei) 陰性。男性Y染色質位於(yu) 間期細胞核近部，易為(wei) 鹽酸阿的平著色，熒光顯微鏡下觀察發較強熒光，呈點狀小體(ti) ，發光部分係Y姿色體(ti) 異固縮的長臂。初代培養(yang) 細胞和二倍體(ti) 細胞株均可觀察到性染色質，傳(chuan) 代細胞係表現不規律。

(二)方法

.碳酸複紅(basic fuchsin)顯示x染色質法

()材料：蓋玻片培養(yang) 的細胞。

(2)染色液

儲(chu) 存液：稱堿性複紅3g，溶於(yu) OOml 70％乙醇中，可保存。

工作液：(現用現配)

儲(chu) 存液               0．0ml

5％石炭酸水溶液      90．0ml

冰醋酸               0．0 ml 

甲醛(40％)           0．0ml

(3)染色步驟

)細胞：蓋玻片培養(yang) 細胞用37℃的BSS漂洗後，立即投入染色液內(nei) 染色5～lOmin(亦可先固定再染色)；如用塗片標本則應待塗片幹後，迅速投入96％酒精固定0～5min後再染色。

2)分化：用96％酒精分化lmin，分化時要不斷搖動，把片子上多餘(yu) 的染料漂洗掉。

3)脫水：通過純酒精lmin。

4)封片：二甲苯透明2~3min，樹膠封固。

(4)結果：細胞質不著色，細胞核染成紫紅色；陽性Barr氏體(ti) 附於(yu) 細胞核膜內(nei) 麵呈三角或半月形小體(ti) 。

2．熒光染色顯不Y染色質法

()材料：蓋玻片培養(yang) 的細胞。

(2)染色液

PBS(pH5．5～6．6)    00．0ml

鹽酸阿的平(atebrine)   0．2g

(3)染色步驟：Y染色質顯示染色與(yu) 染色體(ti) 熒光顯帶法相同。

(4)結果：在熒光顯微鏡下觀察，Y染色質呈特別明亮黃綠色熒光圓點，直徑0．25～ 0．3μm，可位於(yu) 核內(nei) 任何位置，但以近時居多。