細胞有絲分裂的實驗方法

(一)試驗原理

    細胞有絲(si) 分裂指數(mitotic index，MI)是指屬於(yu) 分裂期的細胞占總細胞數的百分率．用於(yu) 表示細胞增殖旺盛的程度，也可用於(yu) 檢測藥物對細胞增殖能力的影響。用蓋玻片培養(yang) 法培養(yang) 細胞，做固定和染色後，鏡下觀察和計數000個(ge) 細胞中處於(yu) 分裂期的細胞數並計算MI。

(二)材料

．待檢材料(藥物)。

2．細胞培養(yang) 成層的貼壁細胞。

3．試劑 甲醇、3％吉姆薩染液。

4．器材CO2培養(yang) 箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2．2 cm×2．2 cm，需預先清洗和滅菌處理)、塑料培養(yang) 皿(3．5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹膠。

(三)實驗方法

．將細胞消化成單個(ge) 細胞懸液，將細胞懸液分瓶培養(yang) ，分成不加藥的對照組和加人不同劑量藥物的實驗組。

2．細胞傳(chuan) 代培養(yang) 的方法培養(yang) 細胞，並製成濃度為(wei) 05／ml的細胞懸液。

3．將清洗和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培養(yang) 皿中，將細胞懸液搖勻後接種於(yu) 培養(yang) 皿中，各皿中接種量相同。

4．分別於(yu) 培養(yang) 24 h、48ht和72h後從(cong) 培養(yang) 皿中取出蓋玻片，在Hanks液中漂洗2～3次。

5．先用甲醇固定30 min，再用吉姆薩染液染色。晾幹後用中性樹膠封片。

6．油鏡下或高倍鏡下計數000個(ge) 細胞中處於(yu) 分裂期的細胞數。

7．計算MI按下列公式計算MI。

(四)結果與(yu) 分析

    將對照組和藥物組的實驗結果繪製成直方圖並加以比較，也可繪製成MI曲線進行比較：

(五)注意事項

．為(wei) 了減少誤差，實驗者必須熟悉各期分裂象細胞的形態特征，該實驗自始至終由一人完成，當兩(liang) 人以上觀察時，應掌握相同的標準。

2．MI曲線與(yu) 細胞生長曲線趨勢基本相似，但不*相同。如果在細胞增長達飽和密壁並進入停止期後．細胞數量很多，而分裂象細胞可*消失。

3．細胞在蓋玻片上的密度常不均勻，細胞密集區與(yu) 區的分裂象細胞數目可能不同。計數時要選擇密度近似區，以減少實驗誤差。