檢測淋巴母細胞的IL一2受體

．原理有絲(si) 分裂原可以使淋巴細胞轉化為(wei) 淋巴母細胞。淋巴母細胞表達豐(feng) 富的IL一2受體(ti) ，該細胞在體(ti) 外IL一2存在時能連續培養(yang) ，並與(yu) IL一2含量呈劑量依賴關(guan) 係。它對有絲(si) 分裂原無反應性或反應極微。因此，在無IL-2依賴細胞株的情況下，可以用此細胞作IL一2檢測。

2．材料

()IL-2待測樣品，用0％FCS RPMI 640培養(yang) 液倍比稀釋。

(2)IL一2、刀豆蛋白A(ConA)標準品。

(3)C57BL／6小鼠。

(4)3 H—TdR(0．5 μci／50μl)。

(5)閃爍液。

(6)9999型玻璃纖維濾紙。

(7)細胞收集儀(yi) 。

(8)8液閃計數儀(yi) 。

3．方法

()取C57BL／6小鼠脾髒磨碎後，配成5×06／ml單個(ge) 細胞懸液。

(2)加入ConA 5 μg／ml，37℃、5％CO2孵箱中培養(yang) 40～48h。

(3)將培養(yang) 的細胞懸液置於(yu) 淋巴細胞分層液上，700 r／mln離心5 min。取界麵層細胞即為(wei) IL一2反應細胞(淋巴母細胞)。

(4)將反應細胞配成×06／ml的懸液，取00μl加入96孔微量培養(yang) 板。

(5)加入00μl待測樣品或IL一2標準品，37℃、5％CO2孵箱中培養(yang) 40～48h。

(6)每孔加入O．5μci。H—TdR，37℃、5％CO2孵箱中培養(yang) 4～6 h。

(7)收集細胞測定3 H—TdR摻人量。

4．結果分析以不同稀釋度的IL一2標準品繪製標準曲線，從(cong) IL一2標準曲線上測得樣品中IL一2的活性單位。

5．注意事項

()此法不必培養(yang) CTLL-2細胞。但由於(yu) 動物的個(ge) 體(ti) 差異，往往使試驗結果批次間差異較大。

(2)淋巴母細胞的誘導和分離技術不易掌握，有時容易混入較多的休止期小淋巴細胞，這些細胞仍保留對ConA的反應性。因此，作為(wei) 檢測細胞所含休止期小細胞不宜超過5%並應設ConA反應對照組。

(3)細胞培養(yang) 收獲的時間一般應以無IL一2的對照細胞絕大多數死亡，而加IL一2的實驗組細胞生長旺盛時為(wei) 佳。