微生物菌種冷凍保存法

    冷凍保存法：適用於(yu) 抗凍力強的微生物。這些微生物可在其菌體(ti) 細胞外遭受凍結的情況下而不受損傷(shang) ，而對其它大多數微生物而言，無論在細胞外凍結還是在細胞內(nei) 凍結，都會(hui) 對菌體(ti) 造成損傷(shang) ，因此當采用這種保藏方法時，應注意以下幾點，

① 要選擇適於(yu) 冷凍幹燥的菌齡細胞；

② 要選擇適宜的培養(yang) 基，因為(wei) 某些微生物對冷凍的抵抗力，常隨培養(yang) 基成分的變化而顯示出巨大差異；

③ 要選擇合適的菌液濃度，通常菌液濃度越高，生存率越高，保存期也越長；

④ 在菌液內(nei) 不添加電解質（如食鹽等）；

⑤ 可在菌液內(nei) 添加甘油等保護劑，以防止在冷凍過程中出現菌體(ti) 大量死亡的現象。同樣，也可添加各種糖類、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護效果的溶劑，但對有些微生物而言，不加保護劑時更有效。

⑥ 原則上應盡快進行冷凍處理，但當加入保護劑時，可靜置一段時間後再進行處理。

⑦ 就動物細胞而言，應在－20℃範圍內(nei) 以℃/min左右的速度緩慢降溫，此後必須盡快降到貯藏溫度；而對絕大多數微生物而言，則不必如此，如結構較為(wei) 複雜的原蟲則可在－35℃範圍內(nei) 進行緩慢降溫，而噬菌體(ti) 則必需采用上述的二階段法進行冷凍；

⑧ 若進行保存，則貯藏溫度越低越好；

⑨ 取用冷凍保存的菌種時，應采取速融措施，即在35～40℃溫水中輕輕振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來說，則應選擇靜置融化的措施。當冷凍菌融化後，應盡量避免再次冷凍，否則菌體(ti) 的存活率將顯著下降。細胞