血清脂蛋白的實驗操作

    原理:將血清脂蛋白用脂類染料（如蘇丹黑或油紅O等）進行預染。再將預染過的血清置於(yu) 瓊脂糖凝膠板上進行電泳分離。通電後，脂蛋白向正極移動，並分離為(wei) 幾個(ge) 區帶。

操作:

．預染血清：血清0.2ml加蘇丹黑染色液0.2ml於(yu) 小試管中，混合後置37℃水浴染色30分鍾，然後離心（2000轉/分，約5分鍾）。

2．製備瓊脂糖凝膠板：將已配製的0.45%瓊脂糖凝膠於(yu) 沸水浴中加熱融化，用吸管吸取凝膠溶液澆注載玻片，每片2.5ml，靜置約半小時後凝固（天熱時需延長，可放冰箱數分鍾加速凝固）。

3．點加血清：已凝固的瓊脂糖凝膠板的一端約2cm處，用切口刀片垂直切入凝膠後立即取出，然後用銅絲(si) 小匙將長方小條凝膠取出。以小片濾紙吸幹小槽中水分，用血色素吸管吸取經過預染的血清約5μl，注入凝膠板上的小槽內(nei) 。

4．電泳：將加過血清的凝膠板平行放入電泳槽中，樣品應在陰極一端。兩(liang) 塊三層紗布於(yu) 緩衝(chong) 液中浸潤，然後輕輕緊密貼在凝膠板兩(liang) 端，紗布的另一端浸於(yu) 電泳槽內(nei) 的緩衝(chong) 液（注意：此電極緩衝(chong) 液不能用三羥甲烷緩衝(chong) 液代替）。接通電源，電壓為(wei) 20~30V，每片電流為(wei) 3~4mA。約經電泳5至55分鍾，即可見分離之色帶。

結果及臨(lin) 床意義(yi) :

．正常人血清脂蛋白可出現三條區帶，從(cong) 負極到正極依次為(wei) β-脂蛋白（zui深）、前β-脂蛋白（zui淺）、α-脂蛋白（比前β-脂蛋白略深些），在原點處應無乳糜微粒。

2．如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深，結合血清甘油三酯明顯升高和正常或略高，可以定為(wei) Ⅳ型高脂蛋白血症。

3．如果β-脂蛋白區帶比正常血清明顯深染者，同時結合血清總明顯增高、甘油三酯正常者為(wei) Ⅱa型；若結合血清總增高而甘油三酯略高的前β略溶者為(wei) Ⅱb型。

4．結果β-和前β-兩(liang) 區帶分離不開連在一起稱“寬β區帶”，結合血清甘油三酯和均有所增高，可定為(wei) Ⅲ型。

5．如果原點出現乳糜微粒，β，前β均正常或減低，結合血清甘油三酯明顯升高，可定為(wei) Ⅰ型。

注意事項:

．電泳樣品要求為(wei) 新鮮的空腹血清。

2．每一塊凝膠上可平行挖兩(liang) 條小槽，因而可加兩(liang) 個(ge) 樣品。

3．如果用一形狀大小和小槽一樣的有機玻璃片，在瓊脂糖膠凝固前固定於(yu) 適當位子上，當凝固後取出有機玻璃片，凝膠板上留下小槽可直接加樣，不需挖槽。

4．如果需要保留電泳樣本，可將電泳後之凝膠板（連同玻片）放於(yu) 清水中浸泡脫鹽2小時，然後放烘箱（80℃左右）烘幹即可。蛋白