PCR技術的基本原理

    聚合酶鏈反應(PolymeraseChainReactionm,PCR)是一項體(ti) 外基因擴增技術,985年美國PE公司人類遺傳(chuan) 研究室發明了該項技術,Saiki等首先應用於(yu) 鐮狀紅細胞貧血的產(chan) 前診斷,但由於(yu) 操作方法繁瑣未能全麵推廣應用。直到988年耐熱DNA聚合酶(Taq酶)的發現和應用,使PCR技術變得極為(wei) 簡單,才被迅速應用於(yu) 分子生物學、生物工程、醫學、法醫學和農(nong) 學等領域,PCR技術已經作為(wei) 分子生物學發展道路上一個(ge) 裏程碑，永載史冊(ce) 。

PCR技術的基本原理

    類似於(yu) DNA的天然複製過程，其特異性依賴於(yu) 與(yu) 靶序列兩(liang) 端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性－－退火－－延伸三個(ge) 基本反應步驟構成：細胞

① 模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93℃左右一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為(wei) 單鏈，以便它與(yu) 引物結合，為(wei) 下輪反應作準備；

② 模板DNA與(yu) 引物的退火(複性)：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與(yu) 模板DNA單鏈的互補序列配對結合；

③引物的延伸：DNA模板－－引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為(wei) 反應原料，靶序列為(wei) 模板，按堿基配對與(yu) 半保留複製原理，合成一條新的與(yu) 模板DNA鏈互補的半保留複製鏈重複循環變性－－退火－－延伸三過程，就可獲得更多的“半保留複製鏈”，而且這種新鏈又可成為(wei) 下次循環的模板。每完成一個(ge) 循環需2～4分鍾，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬(wan) 倍(Plateau)。 到達平台期所需循環次數取決(jue) 於(yu) 樣品中模板的拷貝。在此同時認識到蛋白質是接受RNA的遺傳(chuan) 信息而合成的。細胞